抗CD3／抗CD20双特异性单链抗体的表达、鉴定及活性分析
作者：于蕊; 李世崇; 吴本传; 刘红; 叶玲玲; 陈昭烈
摘要：设计并合成多个60bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得1640bp的抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体完整基因片段,将其克隆入真核定点表达载体pcDNA5/FRT中,脂质体法转染Flp-InTM CHO细胞,获得稳定表达细胞株,目的蛋白在上清中的表达量约为300μg/L.采用Ni-NTA柱对其进行了纯化,经SDS-PAGE蛋白电泳及Western-blot分析结果表明,含组氨酸标签的目的蛋白的分子量约为70kD,与预期结果一致.活细胞间接免疫荧光实验和玫瑰花环实验证明抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体具有与Ramous(CD20+)及Jurkat(CD3+)细胞特异性结合的活性.光学显微镜下可以观察到抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体可以有效介导人外周血淋巴细胞裂解B淋巴瘤细胞Ramous.以上工作为进一步了解抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体的体内体外生物学活性奠定了基础.
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关键词：
- 双特异性单链抗体
- 表达
- 坚定
- 活性分析
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