摘要:为了得到专用于红枣浓缩汁的果胶酶制剂,通过硫酸铵盐析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析技术对白地霉发酵产得果胶酶粗酶液分离纯化,得到电泳纯的果胶酶,并研究了其相关的酶学性质。结果表明:发酵上清液经三步分离纯化后比活力达到8036.34 U/mg,纯化倍数为3.12,回收率37.22%,SDS-PAGE电泳检测分子质量为59.62 ku。最适的作用温度为50℃,p H为6。在低于50℃保温2 h酶活剩余80%以上,60℃保温1 h酶活损失60%;p H稳定范围较窄,在p H(5~7)范围内稳定性较好。Ca~(2+)、Mg~(2+)、K~+对果胶酶有激活效应,尤以Ca~(2+)(180.29%)最为突出,Mn~(2+)、Ag~+、Fe~(3+)对果胶酶有抑制作用,其中Ag~+(44.52%)抑制效果显著。通过Lineweave-Burk作图法得到K_m=8.75 mg/m L,V_(max)=60.24μg/min·m L,表明果胶酶对底物具有较强的亲和力。
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