基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展
摘要：定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法,包括相对定量方法和绝对定量方法,并对其发展进行了展望。基于多级质谱的蛋白质组定量新方法新技术进展
摘要：定量蛋白质组学已经成为蛋白质组学的一个重要分支,以生物质谱为核心的定量蛋白质组方法日益发展。按照定量所依据的质谱信号来源于一级质谱谱图还是多级质谱谱图可以将定量蛋白质组方法分为一级质谱定量和多级质谱定量。本文主要综述基于多级质谱的定量方法和技术进展,分析比较了这些方法的优缺点,并对基于多级质谱的定量方法发展进行了展望。利用液相色谱-质谱多反应监测方法测定食物中主要的牛奶过敏原α-酪蛋白
摘要：采用液相色谱-质谱串联的多反应监测技术检测食物中的牛奶过敏原成分α-酪蛋白,检出限达到了0.5mg/L,与目前已报道的检出限水平相当。该过敏原成分在0.5～250 mg/L范围内线性关系良好,说明本方法对于食品中牛奶过敏原成分的检测具有极好的实际应用价值。组蛋白H3赖氨酸27和36位甲基化修饰的鉴定
摘要：采用液相色谱-质谱联用技术结合生物信息学分析手段,研究Hela细胞组蛋白H3赖氨酸（Lysine（K））K27和K36位点带有甲基化和二甲基化修饰的多肽鉴定,通过二级质谱碎片解析和二级碎片丰度分析,对组蛋白H3赖氨酸K27和K36上甲基化和二甲基化修饰进行了鉴定和分析。一种基于硝酸纤维素膜的新颖便捷的芯片对循环肿瘤细胞的高效捕获
摘要：开发了一种新颖便捷的循环肿瘤细胞（CTC）捕获芯片用于癌细胞的分离和检测。CTC芯片以硝酸纤维素膜为基底制备,利用其对蛋白质的超强吸附能力来结合抗体,简便高效,便于将来大规模的推广应用。以非小肺癌细胞NCI-H1650为目标靶细胞,证明了CTC芯片对癌细胞具有很高的捕获效能。向1 mL正常人血液中加入500个癌细胞模拟病人血样的分析中成功检测到了182个癌细胞,预示了CTC芯片将来在临床应用上的巨大潜力。18O同位素标记定量肽段串联体蛋白质结合同位素稀释-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法
摘要：建立了定量肽段串联体蛋白质（concatamers of Q peptides,QconCATs）结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）表征结果表明重组蛋白质的纯度在99%以上,相对分子质量约为63.4 kDa。对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段。还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价。实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌（Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE）中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20%,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量。更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记（SILAC）技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法。基于巯基-烯点击反应制备有机-无机杂化硼酸亲和整体柱用于糖蛋白的选择性富集
摘要：发展了以巯基-烯点击反应制备有机-无机杂化硼酸亲和整体柱的新方法。首先以四甲氧基硅烷（TMOS）和巯丙基三甲氧基硅烷（MPTMS）作为反应单体,采用溶胶-凝胶反应制备表面含巯基的硅胶整体柱。然后利用巯基-烯（thiol-ene）的点击反应在整体柱上修饰硼酸配基3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA）,制成AAPBA-硅胶杂化亲和整体柱。对影响硼酸亲和整体柱性能的条件如TMOS与MPTMS的比例、聚乙二醇和甲醇的用量等进行了优化。并采用扫描电镜、红外光谱等分析仪器对整体柱形貌和机械稳定性能进行了表征。研究了AAPBA-硅胶杂化亲和整体柱的分离性能,结果表明,其在中性条件下对含有顺式二醇的生物小分子核苷具有良好的特异亲和能力,并已成功地应用于卵清蛋白、辣根过氧化物酶等糖蛋白的分离。基于巯基-烯反应的制备方法新颖、可靠,可用于制备多种不同类型的硼酸亲和整体柱,具有较大的应用前景。一步法和两步法毛细管等电聚焦测定蛋白质和多肽等电点的比较
摘要：利用一步法和两步法毛细管等电聚焦（cIEF）方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点（pI）。讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响。并对一步法和两步法进行了比较。对细胞色素C、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白和牛血清白蛋白以及6种多肽的分析结果表明：一步法步骤简单,分离速度快,可测定单一组分的pI,也能快速分离混合蛋白和多肽,但分离度较差,且不能同时准确测定各组分的pI;两步法步骤复杂,分析时间较长,但能够同时分离并准确测定混合样品中各组分的pI,所测的pI值与单一组分进行测定的结果基本一致。两种方法可相互结合、互为补充,可广泛应用于两性生物微粒等电点的快速和准确测定。毛细管电泳法表征多肽及糖蛋白的稳定性
摘要：建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法。分别以血管紧张素II（Ang II）和植物血球凝集素（PHA）、牛凝血酶（B-Thr）、人凝血酶（H-Thr）、辣根过氧化物酶（HRP）4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子。从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液pH和离子强度等方面优化了血管紧张素II的分离分析条件;从毛细管的选择、样品的电荷状态、电泳缓冲液的选择和分离电压的影响等方面讨论了糖蛋白的分离条件。Ang II和4种糖蛋白的稳定性试验结果表明：Ang II可在pH 7.4的硼酸盐缓冲液（0.02 mol/L）中于4℃下稳定放置48 h;4种糖蛋白可在pH 7.4硼酸盐缓冲液（0.2 mol/L）中于20,4,-20℃下稳定放置48 h;放置时间大于一周且小于四周时,在-20℃下各蛋白质均保持稳定;放置时间大于两周且小于四周时,只有HRP在上述3个温度下均保持稳定。该方法具有高效、快速、简单、低成本的特点,可广泛应用于多肽和蛋白质的稳定性表征。三线性分解算法对液相色谱-质谱联用仪多样本测定数据分辨适用性的比较
摘要：从三线性分解算法对液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）多样本测定数据分辨的适用性角度入手,探讨了双线性和三线性分解算法的实际应用效果、存在的问题及其解决方案。本文选择含有低丰度肽段和高干扰背景信号的代表性测定数据进行测试。结果表明,双线性方法不具有分辨唯一性,不能分离LC-MS多样品测定数据存在的背景干扰,从而不适用于低丰度肽段问题的分析。常规的三线性分解算法难以满足质谱信号具有的数学特性———稀疏性,分辨结果并不完全可靠。本文提出了具有非负约束的交替三线性分解（non-negative alternating trilineardecomposition,NNATLD）新算法用于LC-MS多样本测定数据分辨及数学分离,能够很好地适应质谱的数学特性,且具有计算资源节约和收敛速度快等特点。内标法测定甘油酯上的十一烷酸和13-甲基十四烷酸及其在非正常油脂掺伪识别中的应用
摘要：结合非正常油脂（地沟油）的来源（加热植物油和动物油）及反映其不同来源的重要特征指示物,即连接在甘油酯上的十一烷酸和13-甲基十四烷酸,建立了内标法测定油脂中甘油酯上十一烷酸和13-甲基十四烷酸的方法。多维气相色谱-质谱采用不分流进样和选择性切割可以实现在线净化和富集,提高分析的灵敏度和分离度。十一烷酸和13-甲基十四烷酸的方法检出限分别达到0.070、0.006 mg/kg。此外,研究发现绝大多数正常植物油中十一烷酸和13-甲基十四烷酸的含量比非正常油脂中二者的含量低。通过待测油脂中十一烷酸和13-甲基十四烷酸的含量可以在一定程度上推断食用植物油的品质。应用质量源于设计的理念优化大鼠血浆中大黄蒽醌的分析方法
摘要：应用质量源于设计理念建立一种高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）用于测定大鼠血浆中5种大黄蒽醌。用Plackett-Burman设计考察流动相中甲醇含量、pH值、流速、柱温和进样体积对色谱峰的分离度、理论塔板数、最末洗脱峰的保留时间和拖尾因子的影响,结果显示流动相中甲醇含量、流速和柱温对色谱系统的影响显著（p〈0.05）。继而采用Box-Behnken设计结合响应面法考察上述三因素对分离度、保留时间和理论塔板数的影响。用Derringer渴求函数评价了响应值的综合作用。得出最优色谱条件为：以甲醇-0.1%（v/v）磷酸水溶液（81.4∶18.6,v/v）为流动相等度洗脱,流速1.1 mL/min,柱温31℃,荧光检测激发波长为440 nm,发射波长为540 nm。建立的模型显示良好的预测性。结果表明：质量源于设计的理念可有效地应用于优化高效液相色谱分析方法。高效液相色谱法同时测定水体中的环丙沙星和氟甲喹
摘要：为了满足实验室测试和野外测试需要,也为其他学者研究不同抗生素之间的相互作用提供相关的资料,本研究选用环丙沙星（CIP）和氟甲喹（FLU）作为代表,建立了一种简单、稳定、易普及的高效液相色谱法用于同时快速测定水体中两种氟喹诺酮类抗生素的含量,并讨论了不同流动相及其比例和水样中几种常见阴、阳离子（Ca2＋、Mg2＋、Fe3＋、Al3＋、SO24-和HCO3-）对抗生素测定的影响。结果表明：三乙胺对改善柱效有明显效果;低浓度离子对测试影响不大,但Fe3＋和Al3＋可能与固定相的表面羟基或测试组分发生配合作用,造成基线不稳。实验结果对其他研究者对于流动相的选择与优化具有借鉴意义。高效液相色谱-荧光检测法同时测定体外循环下狗血浆中的阿曲库铵和劳丹碱
摘要：建立了测定体外循环下狗血浆中阿曲库铵及其代谢产物劳丹碱的高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）分析方法。使用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱分离,以0.03 mol/L磷酸氢二钾（pH 5.0）-乙腈（72∶28,v/v）为流动相,流速1.0 mL/min。以维拉帕米为内标,样品经二氯甲烷萃取、浓缩后以流动相溶解进样,荧光检测的激发波长和发射波长分别为240和320 nm。结果表明,阿曲库铵和劳丹碱分别在25～5 000μg/L和25～6 000μg/L范围内线性关系良好（r=0.999 0和r=0.998 4）;方法回收率在92.1%～109.5%之间;检出限分别为3μg/L和1μg/L;日内和日间精密度（以RSD计）均小于10%;稳定性试验结果显示样品在不同存储条件下的稳定性良好。该方法选择性好,灵敏度高,结果准确,重现性好,可用于阿曲库铵和劳丹碱的血药浓度测定及其药代动力学研究。在线衍生-高效液相色谱法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物
摘要：建立了醋酸锌在线衍生高效液相色谱法同时测定血浆中色氨酸（Trp）、犬尿氨酸（Kyn）、5-羟吲哚乙酸（5-Hiaa）和犬尿喹啉酸（Kyna）的方法。以3-硝基酪氨酸为内标（IS）,采用Hypersil C-18柱（250 mm×4.0 mm,5μm）,以250 mmol/L醋酸锌溶液（pH 5.5）-乙腈（95∶5,v/v）为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温30℃。荧光检测波长设定：5-Hiaa为278 nm（λex）/343 nm（λem）,Kyna为244 nm（λex）/400 nm（λem）;紫外检测波长设定：Kyn和IS为360 nm,Trp为302 nm。4种物质的回收率在91.62%～114.17%之间;线性范围分别为2.50～320.00μmol/L（Trp）,0.32～15.36μmol/L（Kyn）,3.27～104.60 nmol/L（5-Hiaa）,14.00～464.80 nmol/L（Kyna）;检出限分别为0.078μmol/L（Trp）,0.056μmol/L（Kyn）,0.690 nmol/L（5-Hiaa）,1.290 nmol/L（Kyna）。利用该方法对30例正常孕妇和28例女性健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp,Kyn和Kyna含量有显著性差异。该方法操作简便,重复性好,灵敏度高,适合于临床检测。结直肠癌组织中K-ras基因突变的毛细管电泳检测
摘要：通过对PCR扩增的76例结直肠癌组织及癌旁正常组织DNA基因组共152个样本纯化变性后,采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测（CE-LIF）结合单链构象多态性（SSCP）分析方法检测了人结直肠癌组织及癌旁正常组织中K-ras基因第12/13位密码子突变。所检测的76例结直肠癌患者中有30例患者存在基因突变,并对异常片段进行测序验证,测序证实以碱基G→A点突变为主。结果表明所建立的CE-LIF技术结合SSCP分析检测K-ras基因突变的方法高效、快速、灵敏、准确,适合于临床上大样本结直肠癌中K-ras基因突变分析,对选择抗结直肠癌药物有一定的指导作用。橄榄醇分子印迹聚合物的制备及评价（英文）
摘要：以橄榄醇为模板分子,α-甲基丙烯酸（MAA）为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）为交联剂,甲苯和十二醇为溶剂,通过本体聚合法制备了橄榄醇分子印迹聚合物。利用平衡结合实验、扫描电镜（SEM）及红外光谱（FTIR）对分子印迹聚合物（MIP）进行了表征,并用该聚合物进行了加标麦麸中橄榄醇的固相萃取（SPE）研究。平衡结合实验表明MIP对模板分子具有更好的识别性。Scatchard分析表明对橄榄醇分子的吸附存在2类不同结合位点,其中高亲和力结合位点和低亲和力结合位点的解离常数分别为0.021和1.002 mmol/L,相应的最大表观结合量分别为18.74和135.9μmol/g。在优化的固相萃取条件下,MIP固相萃取柱对加标麦麸中橄榄醇的回收率达到97.8%～98.8%,相对标准偏差为2.8%～4.2%（n=5）,线性范围为0.1～100 mg/L,检出限（S/N=3）为0.062mg/L。与非印迹聚合物（NIP）柱及市售聚苯乙烯/二乙烯基苯（PLS）柱相比,MIP柱的选择性更强,回收率更高,纯化效果更好。裂解气相色谱-质谱法分析裂解气压缩机垢样的组成
摘要：采用裂解气相色谱-质谱联用技术对大庆石化公司裂解气压缩机EC301不同压缩段的垢样进行分析。实验使用了RJ-1型管炉式裂解器,在500℃下对垢样进行裂解,色谱柱为60 m DB-1型毛细管色谱柱,质谱采用电子轰击电离源,电离能70 eV。研究表明,垢样的形成与环戊二烯密切相关。裂解气相色谱-质谱法可以作为分析该垢样成因的有效手段。
