山东医药杂志 统计源期刊

山东医药 2018年第05期杂志 文档列表

山东医药杂志论著

Bmi-1基因沉默对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响1-4

摘要：目的探讨慢病毒靶向沉默Bmi-1基因对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响。方法设计3条Bmi-1shRNA干扰系列,构建慢病毒重组载体PLVx-shRNA2-Bmi-1,用重组载体转染293T细胞,收集上层病毒液浓缩、滴定。将CNE2细胞随机分为5组,对照组不进行感染,shRNA1、2、3组分别感染表达shRNA1、2、3的慢病毒,空载体组感染空载的慢病毒。感染48 h,用RT-PCR及Western blotting法分别检测Bmi-1基因及蛋白的相对表达量,筛选沉默Bmi-1效率最佳的干扰序列。用平板克隆形成实验检测Bmi-1基因沉默后CNE2细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布。结果插入的序列与设计的3条shRNA序列碱基排列一致,说明目的片段均已正确插入,PLVx-shRNA_2-Bmi-1慢病毒表达载体构建成功。与其他两组比较,Bmi-1-shRNA1、2、3组Bmi-1 mRNA及蛋白相对表达量低（P均〈0.05）,Bmi-1-shRNA3组最低（P均〈0.05）,沉默效率最佳。与空载体组比较,Bmi-1-shRNA3组增殖能力弱（P均〈0.05）,细胞凋亡率高（P均〈0.05）,Bmi-1-shRNA3组G1期细胞比例高、S期细胞比例低（P均〈0.05）。结论沉默Bmi-1基因可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、促进其凋亡,并改变细胞周期。

KDM2B过表达慢病毒载体构建及其在人卵巢癌细胞中的表达5-8

摘要：目的构建赖氨酸特异性脱甲基酶2B（KDM2B）过表达慢病毒载体,并探讨其是否能在人卵巢癌细胞A2780及SKOV3中稳定表达。方法根据Gen-Bank数据库提供的KDM2B基因序列,用限制性内切酶获得线性化载体,制备目的基因片段并用GV慢病毒载体改造和包装病毒,对阳性克隆重组产物进行测序及鉴定。用LV-KDM2B过表达慢病毒感染A2780、SKOV3细胞（LV-KDM2B感染组）,同时感染LV-CON作为阴性对照（LV-CON感染组）,未感染的A2780、SKOV3细胞作为空白对照组。采用RT-PCR和Western blotting法分别检测细胞中KDM2B mRNA及蛋白表达。结果慢病毒阳性克隆载体测序结果与目标序列完全一致。LV-KDM2B感染组A2780、SKOV3细胞中KDM2B mRNA及蛋白表达均较LV-CON感染组、空白对照组高,比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论 KDM2B过表达慢病毒载体构建成功,且其可在人卵巢癌细胞A2780、SKOV3中稳定表达。

医药学名词常见错误及正确写法8-8

摘要：药品名称：错误（正确）二磷酸腺苷（腺苷二磷酸）,消炎痛（吲哚美辛）,阿斯匹林（阿司匹林）,维甲酸（维A酸）,双磷酸盐（双膦酸盐）,甲氨喋呤（甲氨蝶呤）,博莱霉素（博来霉素）,开浦兰（左乙拉西坦）,雷公多苷（雷公藤多苷）,非那根（异丙嗪）,四乙铵（四乙胺）,洗必泰（氯已定）,美息律（美西律）,大环内脂类（大环内酯类）,川穹（川芎）,酒精（乙醇）,头胞哌酮（头孢哌酮）。

SLE合并SONFH患者血清差异表达蛋白筛查9-12

摘要：目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）合并激素性股骨头坏死（SONFH）患者血清蛋白质组学表达差异,寻找并鉴定诊断SONFH的潜在生物学标志物。方法分别采集10例SLE合并SONFH患者（SONFH组）、5例健康者（对照组）的外周血,提取血清,去除高丰度血清蛋白质,采用同位素相对标记与绝对定量技术联合二维液相色谱-串联质谱技术进行蛋白组学分析,并进一步行GO和KEGG通路生物信息学分析,寻找并鉴定差异表达的蛋白质。结果与对照组比较,SONFH组共鉴定出16个差异表达蛋白,其中铜蓝蛋白、结合珠蛋白、IGHG1蛋白、免疫球蛋白重链1、C反应蛋白、补体C9、α1-酸性糖蛋白表达上调（P均〈0.05）,SERPINA4蛋白、凝溶胶蛋白、凝血因子Ⅻ、色素上皮细胞衍生因子、备解素、巯基氧化酶1、凝血因子ⅩⅢ、KRTDAP蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白3表达下调（P均〈0.05）。KEGG通路分析提示以上16个蛋白与补体及凝血级联反应、系统性红斑狼疮、肌动蛋白细胞骨架调节、p53信号通路、卟啉和叶绿素代谢、FcγR-介导吞噬信号通路密切相关。结论成功从SLE合并SONFH患者血清筛选出差异表达蛋白,此16个蛋白可能是诊断SONFH的潜在生物学标志物。

荔枝核总黄酮对TGF-β_1诱导人肝星状细胞凋亡的影响及机制13-16

摘要：目的探讨荔枝核总黄酮（TFL）对转化生长因子β_1（TGF-β_1）诱导的人肝星状细胞（HSC-LX2）凋亡的影响,探讨其相关的分子机制。方法将培养好的HSC-LX2随机分为正常组、TGF-β_1组及150、300、600 mg/L TFL组。正常组常规培养;其他四组接种于含10%FBS的DMEM＋5μg/L TGF-β_1、培养皿中培养24 h后,150、300、600 mg/L TFL组分别加入150、300、600 mg/L TFL继续培养48 h。用Hoechst33258染色法观察各组细胞形态学变化;用流式细胞术检测细胞周期;用FITC Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况;用Western blotting法检测细胞中Toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB）、白细胞介素1受体Ⅰ（IL-1RⅠ）蛋白表达。结果正常组、TGF-β_1组细胞核形态完整,TGF-β_1组细胞增殖活跃;150、300、600 mg/L TFL组可见细胞核固缩、裂解、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化。随TFL浓度升高,TFL组G0/G1期细胞增多（P〈0.05）,S期细胞减少（P〈0.05）。随TFL浓度升高,TFL对HSC-LX2凋亡具有促进作用,更倾向于促进细胞晚期凋亡。150、300、600 mg/L TFL组TLR4、NF-κB、IL-1RⅠ蛋白表达量低于TGF-β_1组（P均〈0.05）;且随TFL浓度升高,HSC-LX2内TLR4、NF-κB、IL-1RⅠ蛋白表达量逐渐降低（P均〈0.05）。结论 TFL可促进TGF-β_1诱导的HSC-LX2细胞凋亡,尤其促进细胞晚期凋亡;其分子机制可能与降低细胞内TLR4、NF-κB、IL-1RⅠ的表达有关。

DKK1基因过表达慢病毒载体构建及其在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中的表达17-20

摘要：目的构建DKK1基因过表达慢病毒载体,并探讨其是否能在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中高效、稳定表达。方法 PCR法扩增DKK1基因序列,将其转入质粒并整合到载体上,构建GV358-DKK1慢病毒表达载体;将构建成功的目的质粒和辅助包装质粒共转染293T细胞对慢病毒进行包装,荧光显微镜观察基因在293T细胞中的表达,用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。将培养好的PC12细胞随机分为三组,空载体阴性对照组、PC12-DKK1组分别用制备的空载体慢病毒及GV358-DKK1颗粒进行感染,空白对照组常规培养。用qRT-PCR和Western blotting法分别检测PC12细胞中DKK1 mRNA与蛋白的相对表达量。结果限制性内切酶鉴定及测序结果提示GV358-DKK1慢病毒表达载体构建成功,转染293T细胞获得高滴度的病毒。PC12-DKK1组DKK1 mRNA及蛋白相对表达量均较空载体组、空白对照组高（P均〈0.05）。结论 DKK1基因过表达慢病毒载体构建成功,且其可在PC12细胞中稳定表达。

文后参考文献的著录方法20-20

摘要：按GB/T7714-2005《文后参考文献著录规划》采用顺序编码制著录,依照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字加方括号标出。参考文献中的作者1~3名全部列出,3名以上只列前3名,后加＂,等＂或其他与之相应的文字。外文期刊名称用缩写,以《Index Medicus》中的格式为准;中文期刊用全名。论文题目后加文献类型及标识,如专著[M]、期刊文章[J]等。

肾移植术后急性排斥反应患者血浆miRNA特异性表达谱筛选21-24

摘要：目的探讨肾移植术后急性排斥反应（AR）患者血浆microRNA（miRNA）表达变化。方法选取行同种异体供肾移植术的患者26例（AR 13例、非AR 13例）及同期体检健康者10例,提取其肘静脉血浆。随机选取3份AR患者及3份非AR患者血浆,用微阵列芯片技术筛选miRNA标记物。根据miRNA标记物筛选结果,用PCR技术检测剩余10份AR患者、10份非AR患者及10份体检健康者血浆中miR-142-5p、miR-144-5p及miR-130a-3p的表达。结果 AR患者与非AR患者共检测出96个差异表达的miRNA,其中13个（13.5%）miRNA表达上调（P均〈0.05）、7个（7.3%）miRNA表达下调（P均〈0.05）。AR患者血浆miR-142-5p、miR-144-5p、miR-130a-3p相对表达量均高于非AR患者、体检健康者（P均〈0.05）,非AR患者、体检健康者血浆miR-142-5p、miR-144-5p、miR-130a-3p相对表达量比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论肾移植术后AR患者血浆miR-142-5p、miR-144-5p、miR-130a-3p呈特异性高表达。

长链非编码RNA HOTAIR在急性髓系白血病患者外周血中的表达变化及意义25-28

摘要：目的观察长链非编码RNA HOTAIR（lncRNA HOTAIR）在急性髓系白血病（AML）患者外周血中的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择96例初诊AML患者（诱导化疗86例、完全缓解56例）、30例健康志愿者,采用qRT-PCR法检测AML患者及健康志愿者外周血单核细胞中lncRNA HOTAIR表达;分析HOTAIR表达与AML患者临床病理参数的关系;对完全缓解期56例患者进行随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA HOTAIR表达与患者预后的关系。结果初诊AML患者外周血lncRNA HOTAIR相对表达量高于健康志愿者（P〈0.05）;完全缓解期患者化疗后外周血lncRNA HOTAIR相对表达量低于化疗前（P〈0.05）。LncRNA HOTAIR高表达与AML患者年龄、性别、FAB亚型、是否完全缓解及AML危险度分层无关（P均〉0.05）,与AML患者白细胞计数、血小板、血红蛋白水平有关（P均〈0.05）。lncRNA HOTAIR高表达患者化疗完全缓解率低于低表达患者（P=0.000）;lncRNA HOTAIR高表达完全缓解患者的总生存时间短于lncRNA HOTAIR低表达完全缓解患者（P=0.000）。结论 AML患者外周血中lncRNA HOTAIR呈高表达,其表达变化可反映AML发生、发展、化疗效果及预后。

《山东医药》参考文献著录要求28-28

摘要：每篇论文须标引参考文献10~20条。正文中引用的文献采用顺序编码制,以引用文献的先后顺序连续编码,并将序号置于方括号中。文后参考文献按GB/T7714-2005《文后参考文献著录规则》采用顺序编码制标注,序号置于方括号中,排列于文后。内部刊物、未发表资料、个人通信等请勿作为文献引用,确需引用时,可将其在正文相应处注明。引用文献（包括文字和表达的原意）务请作者与原文核对无误。

山东医药杂志基础研究

表达IP10基因重组新城疫病毒的拯救29-31

摘要：目的拯救携带IP10基因的重组新城疫病毒（r NDV-IP10）。方法用重组酶将IP10基因插入r NDV质粒,将重组BRN-FL-IP10质粒和辅助质粒共转染稳定表达T7RNA聚合酶的BSR-7细胞进行病毒拯救。用鸡红细胞检测重组病毒的血凝效价;用NDV及r NDV分别感染鸡胚成纤维细胞,检测病毒的生长动力学;用NDV及r NDV分别感染乳仓鼠肾细胞（BHK-2细胞）,间接免疫荧光技术检测IP10蛋白的表达;将r NDV-IP10重组病毒感染人肝癌细胞低转移株（MHCC-97L）,Western blotting法检测细胞中IP10蛋白表达。结果鸡红细胞血凝效价为阳性,重组病毒r NDV-IP10的生长特征与亲本NDV相比相似。感染了r NDV-IP10的BHK-2细胞具有特异性荧光,感染了r NDV-IP10的MHCC-97L细胞具有特异性条带。结论成功拯救出能够表达IP10基因的重组病毒r NDV-IP10。

ONECUT1重组质粒构建及其对细胞应激相关基因表达的影响32-34

摘要：目的构建ONECUT1重组质粒,并探讨其重组对细胞应激相关基因表达的影响。方法用重组DNA技术及RT-PCR法体外构建人源ONECUT1-pc DNA3.1（-）表达质粒,并测序。将培养好的U251细胞随机分为转染组、空载组,分别转染ONECUT1重组质粒及空载质粒。采用qRT-PCR法检测两组细胞内线粒体抗氧化应激相关基因（SOD1、CAT、GPX1、PRDX1、SIRT1、NQO1、Gc Lm、Gc Lc、NRF2、KEAP1、PARK7）及内质网应激相关基因（MANF、PERK、IRE1α、ATF6）的表达。结果电泳结果显示,在DNA Marker 1 000~1 500 bp出现单带,即为插入的全部CDS序列,1 398 bp,测序证实质粒构建成功。与空载组比较,转染组线粒体抗氧化应激相关基因CAT、PRDX1、SIRT1、NQO1、Gc Lm、Gc Lc、PARK7表达上调（P均〈0.05）,SOD1、GPX1、NRF2、KEAP1表达差异无统计学意义（P均〉0.05）。与空载组比较,转染组内质网应激相关基因MANF、IRE1α、PERK、ATF6表达差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论成功构建ONECUT1重组质粒,ONECUT1可使细胞内部分抗氧化应激相关基因表达上调,但对内质网应激相关基因的表达无影响。

KP对早期胎盘滋养层细胞迁移及细胞内ERK、MMP-9、VEGF表达的影响35-37

摘要：目的探讨黑色素转移抑制基因（KP）对早期胎盘滋养层细胞迁移及细胞内细胞外调节蛋白激酶（ERK）、MMP-9、VEGF表达的影响。方法取自愿终止妊娠者胎盘,剪取胎盘绒毛膜组织,分离并培养滋养层细胞。将滋养层细胞随机分为三组,对照组常规培养,KP组加入终浓度为100 nmol/L KP蛋白进行培养,KP＋P234组加入终浓度为100 nmol/L KP蛋白及其抑制剂P234（终浓度5μmol/L）进行培养,均培养30 min。用细胞划痕实验检测各组滋养层细胞迁移率;荧光定量PCR法检测细胞内KP、GPR54、MMP-9、VEGF mRNA表达;Western blotting法检测细胞内ERK蛋白表达。结果与对照组比较,KP组、KP＋P234组细胞迁移率低（P均〈0.05）,KP组最低（P〈0.05）。KP组KP mRNA相对表达量较KP＋234组高（P〈0.05）,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;三组GPR54 mRNA相对表达量比较,P均〉0.05;与对照组比较,KP组、KP±P234组MMP-9、VEGF mRNA相对表达量低（P均〈0.05）,KP组最低（P均〈0.05）。与对照组比较,KP组、KP±P234组ERK蛋白相对表达量低（P均〈0.05）,KP组最低（P〈0.05）。结论 KP可抑制早期胎盘滋养层细胞迁移,抑制细胞内ERK、MMP-9及VEGF表达。

G_0S_2基因在食管癌组织中表达变化及对癌细胞增殖、凋亡的影响37-39

摘要：目的观察G_0S_2基因在食管癌组织中的表达变化,并探讨其对食管癌细胞增殖、凋亡的影响。方法用qRT-PCR技术检测45例食管癌组织及其癌旁组织中G_0S_2基因表达。将培养好的食管癌KYSE-70细胞随机分为7组,Ad-Null组、Ad-G_0S_2组分别转染腺病毒介导的G_0S_2（Ad-G_0S_2）、空载体（Ad-Null）,0、25、50、100μmol/L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组分别给予0、25、50、100μmol/L的甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷进行处理,均培养24 h。用CCK-8法检测各组细胞增殖能力吸光度,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果 G_0S_2基因在食管癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为31.9±7.8、1,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。与其他两组比较,Ad-G_0S_2组吸光度低（P均〈0.05）、凋亡率高（P均〈0.05）,空白组与Ad-Null组吸光度、凋亡率比较差异无统计学意义（P均〉0.05）;随5-氮杂-2-脱氧胞苷浓度升高,细胞增殖能力降低、凋亡率升高（P均〈0.05）。结论G_0S_2基因在食管癌组织中低表达,其可抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡。

山东医药杂志临床研究

上消化道出血患者红细胞分布宽度变化及意义40-42

摘要：目的观察上消化道出血（UGIH）患者红细胞分布宽度（RDW）变化,并探讨其临床意义。方法收集UGIH患者200例作为UGIH组、体检健康者90例作为健康对照组。UGIH组入院后均给予对症治疗。根据出血量将UGIH组分为出血〈250 m L 75例、出血250~400 m L 64例、出血〉400 m L 61例。UGIH组于治疗前后,对照组于体检时检测血常规及RDW。采用Spearman相关分析RDW与血红蛋白（Hb）、红细胞（RBC）、血小板（HCT）的相关性。结果出血〈250 m L的患者Hb、RBC、HCT与健康对照组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）,而RDW值较健康对照组高（P均〈0.05）;出血250~400 m L、出血〉400 m L的患者Hb、RBC、HCT及RDW值与健康对照组比较差异有统计学意义（P均〈0.05）。治疗前UGIH组Hb、RBC、HCT较健康对照组低,RDW值较健康对照组高（P均〈0.05）。与治疗前比较,治疗第4、7天UGIH组Hb、RBC、HCT升高（P均〈0.05）,RDW值降低（P均〈0.05）,至治疗第7天以上指标基本恢复正常。RDW与Hb、RBC、HCT均呈负相关（r分别为-0.659、-0.571、-0.498,P均〈0.05）。结论 UGIH患者RDW值升高,且RDW变化可反映患者出血量及病情转归。

食管鳞癌组织中ABCG2、p16表达变化及意义42-44

摘要：目的观察食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2（ABCG2）及p16表达变化,并探讨其临床意义。方法选取136例份ESCC组织及37例份正常食管黏膜组织（距癌组织〉5 cm）,用免疫组化SP染色法检测两种组织中ABCG2及p16蛋白表达,用qRT-PCR法检测两种组织中ABCG2与p16 mRNA表达。分析ABCG2及p16蛋白阳性表达与患者临床病理参数的关系,用Spearman等级相关分析ABCG2、p16表达的相关性。结果与正常食管黏膜组织比较,ESCC组织中ABCG2蛋白阳性表达率高（P〈0.05）、p16蛋白阳性表达率低（P〈0.05）。与正常食管黏膜组织比较,ESCC组织中ABCG2 mRNA相对表达量高（P〈0.05）、p16 mRNA相对表达量低（P〈0.05）。ABCG2及p16蛋白阳性表达与食管鳞癌肿瘤浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关（P均〈0.05）,与患者性别、年龄及肿瘤组织学分级无关（P均〉0.05）。ESCC组织中ABCG2与p16蛋白表达呈负相关（r=-0.438,P〈0.05）。结论 ABCG2在ESCC组织中呈高表达,p16呈低表达;二者可能协同作用参与ESCC的发生发展。

全腔镜Ivor-Lewis术与McKeown术治疗中下段食管癌效果对比45-47

摘要：目的比较全腔镜Ivor-Lewis术与McKeown术治疗中下段食管癌的效果。方法选择中下段食管癌患者129例,其中接受Ivor-Lewis术73例（Ivor-Lewis组）,接受McKeown术56例（McKeown组）。对比两组手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数、胸腔引流管留置时间、术后住院时间、住院费用;记录两组肺部感染、肺不张、胃排空延迟、乳糜胸、吻合口漏、吻合口狭窄、喉返神经损伤等术后并发症;术后6个月观察两组复发情况。结果两组手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数、胸腔引流管留置时间、术后住院时间及住院费用比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。Ivor-Lewis组吻合口漏、吻合口狭窄、喉返神经损伤发生率低于McKeown组（P均〈0.05）,两组肺部感染、肺不张、胃排空延迟、乳糜胸及并发症总发生率比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。两组复发率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论全腔镜Ivor-Lewis术与McKeown术治疗中下段食管癌均安全有效,但Ivor-Lewis术较McKeown术吻合口漏、吻合口狭窄、喉返神经损伤的发生率低。

心率减速力在2型糖尿病心脏自主神经病变诊断中的应用48-50

摘要：目的探讨心率减速力（DC）在2型糖尿病心脏自主神经病变（DCAN）诊断中的价值。方法选取2型糖尿病患者80例作为观察组、体检健康者80例作为对照组。两组均进行24 h动态心电图检测,计算DC值及心率变异性（HRV）时域参数,包括R-R间期标准差（SDNN）、R-R间期之差的均方根（RMSSD）、24 h连续R-R间期标准差≥50 ms的百分数（p NN50）;采用Pearson相关分析DC值与HRV时域参数的关系。结果观察组DC值及HRV时域参数均较对照组低（P均〈0.05）。DC值与SDNN、RMSSD、p NN50呈正相关（r分别为0.62、0.57、0.52,P均〈0.05）。结论 DC的检测有助于诊断2型糖尿病患者的DCAN。