山东医药杂志 统计源期刊

山东医药 2016年第21期杂志 文档列表

山东医药杂志论著

Eμ-VH启动子调控c-Myc表达慢病毒载体的构建及其体外功能1-3

摘要：目的构建人B淋巴细胞特异性启动子Eμ-VH调控癌基因c-Myc表达的慢病毒载体（pEMIR）,并探讨其体外功能。方法以pLV-c-Myc-IRES-增强绿色荧光蛋白（EGFP）为模板,经PCR扩增、酶切后得到pEVCHR;以pEVCHR为模板,PCR扩增、酶切后得到慢病毒载体pEMIR,并行测序和酶切鉴定。将pEMIR分别瞬时转染入人源胚胎肾细胞293T、人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株（OCL-Ly3、OCL-Ly10）,倒置荧光显微镜检测各细胞EGFP和单体红色荧光蛋白（mRFP）的表达,用qRT-PCR法检测细胞内c-Myc mRNA表达,用Western blotting法检测293T细胞c-Myc蛋白表达。结果 Eμ-VH-c-Myc-H2BmRFP基因片段电泳结果与预测值4 129 bp相符,Vector DNA电泳可见一条带与预测值8 561 bp相符;pEMIR酶切并电泳的结果与理论预测值相符;对pEMIR质粒进行测序,结果与预期相符,证明pEMIR构建成功。三种细胞经pEMIR转染后,倒置荧光显微镜下可见绿色和红色荧光,同时转基因c-Myc表达正常。结论成功构建Eμ-VH启动子调控c-Myc表达的慢病毒载体,体外实验证明该载体能够在人正常细胞和肿瘤细胞中均可发挥功能。

单倍体造血干细胞移植治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床疗效（附1例报告）4-6

摘要：目的观察单倍体造血干细胞移植治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）的疗效。方法 1例男性43岁PNH患者,行单倍体造血干细胞移植。预处理方案为非清髓的氟达拉滨/环磷酰胺＋抗人T细胞兔免疫球蛋白方案;移植物抗宿主病（GVHD）预防采用环孢素A＋吗替麦考酚酯＋短程甲氨蝶呤方案;肝静脉阻塞病预防采用前列地尔、复方丹参注射液;单倍体造血干细胞供者为其子,患者移植单个核细胞6.51×108/kg,CD34＋细胞4.62×106/kg。移植后检测血常规、肝功能,采用糖水试验、Ham＇s试验观察溶血情况,用流式细胞术监测外周血细胞表面的CD55、CD59及嗜水气单胞菌溶素变异体（FLAER）,抽取骨髓液进行骨髓细胞学及染色体检查。结果患者移植后第15天中性粒细胞〉0.5×109/L;移植后第19天血小板〉20×109/L;移植后第35天糖水试验、Ham＇s试验均转阴,CD55、CD59、ELAER检测结果均正常。随访406 d,患者血常规、骨髓象检查正常,未发生急性GVHD,有慢性皮肤GVHD（局限性）。结论本例PNH患者经单倍体造血干细胞移植治疗后造血功能稳定重建。

UHRF1表达下调对胃癌细胞增殖的抑制作用及机制7-9

摘要：目的探讨泛素样含PHD和环指域1（UHRF1）表达下调后对胃癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法将培养好的人胃癌细胞系（MKN45）随机分为空白对照组、阴性对照组（sh NC）和干扰组,后两组分别感染病毒sh NC、sh UHRF1,采用短发夹RNA（shRNA）技术下调MKN45细胞中UHRF1表达,XTT法测定各组细胞生长情况,平板克隆形成试验测算细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;裸鼠皮下成瘤试验检测细胞体内生长能力。结果 UHRF1表达下调后,MKN45细胞生长速度明显下降、克隆形成减少（P均〈0.05）;干扰组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少（P均〈0.05）,细胞凋亡率升高（P均〈0.05）;裸鼠皮下肿瘤生长速度下降（P〈0.01）。结论下调UHRF1的表达能够抑制胃癌细胞增殖,该作用可能通过延长细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的。

miR-206对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制10-12

摘要：目的观察微小RNA-206（miR-206）对β-甘油磷酸钠（β-GP）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响,并探讨其机制。方法取原代培养大鼠主动脉VSMCs并进行细胞鉴定。将VSMCs随机分为5组：空白对照组、模拟物阴性对照组、miR-206模拟物组、抑制物阴性对照组、miR-206抑制物组,用脂质体Lipo2000进行转染。转染后48 h,各组给予β-GP 10 mmol/L诱导VSMCs钙化。诱导4 d,茜素红染色镜下观察各组钙化情况,采用微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性,采用免疫荧光法检测细胞缝隙连接蛋白43（Cx43）表达。结果VSMCs转染后48 h,经β-GP诱导4 d,与阴性对照组比较,miR-206模拟物组钙化结节减少,miR-206抑制物组钙化结节增多;与阴性对照组比较,miR-206模拟物组ALP活性及Cx43表达降低（P均〈0.05）,miR-206抑制物组ALP活性及Cx43表达升高（P均〈0.05）。结论 miR-206可能通过调控Cx43表达抑制β-GP诱导的大鼠VSMCs钙化。

耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性13-15

摘要：目的观察电压门控氯通道3（Cl C-3）、P-糖蛋白（P-gp）在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1（MDR1）mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8（P均〈0.05）,在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关（r=0.98,P〈0.05）。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。

类风湿关节炎患者血清Lp-PLA2水平与颈动脉粥样硬化的关系16-18

摘要：目的探讨类风湿关节炎（RA）患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）与颈动脉粥样硬化（CAS）的关系。方法选择RA患者72例作为RA组（疾病缓解期28例、疾病活动期44例）、健康人50例作为对照组。采用颈动脉彩色多普勒超声诊断仪进行CAS检查,比较两组CAS患病率及颈总动脉内中膜厚度（IMT）值;采用半自动免疫比浊法检测血清Lp-PLA2水平,比较RA患者活动期及缓解期血清Lp-PLA2水平差异,比较不同Lp-PLA2血清水平RA患者CAS患病率的差异;采用Spearman相关分析指标的关系,采用Logistic回归分析RA合并CAS的危险因素。结果 RA组CAS患病率、颈动脉IMT值高于对照组（P均〈0.05）。RA合并CAS者血清Lp-PLA2水平高于RA未合并CAS者,RA患者活动期血清Lp-PLA2水平较缓解期升高,RA患者Lp-PLA2水平越高CAS的患病率越高（P均〈0.05）。Spearman相关分析显示,血清Lp-PLA2水平与颈动脉IMT值呈正相关（rs=0.154,P〈0.05）。Logistic回归分析显示,血清Lp-PLA2水平升高为RA患者发生CAS的危险因素（OR=2.52,P〈0.05）。结论血清Lp-PLA2水平升高可能促进RA患者发生CAS。

耐碳青霉烯酶类抗生素鲍曼不动杆菌的同源性及其对亚胺培南的耐药机制19-21

摘要：目的探讨耐碳青霉烯酶类抗生素鲍曼不动杆菌（AB）的同源性及其对亚胺培南的耐药机制。方法用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析法（ARDRA）对临床收集的140株AB进行分子分型,用肠杆菌科重复基因保守序列PCR（ERIC-PCR）对确定为AB的菌株进行同源性分析,用荧光定量PCR法检测20株耐药菌株和20株敏感菌株外膜蛋白Car O和外排泵基因Ade B mRNA表达。结果 140株菌株经ARDRA鉴定为AB的130株。90株AB经ERIC-PCR法分为6个型别,主要为A型（65株）、B型（19株）,C、D、E、F型为散在株。AB耐药菌株外膜蛋白Car O mRNA相对表达量低于敏感菌株,外排泵Ade B mRNA相对表达量高于敏感菌株（P均〈0.05）。结论分离的AB基因型以A、B两型为主,且存在部分克隆株散在传播;外膜蛋白Caro低表达、外排泵基因Ade B高表达是AB对亚胺培南耐药的重要机制。

三子止咳胶囊对COPD稳定期患者肺功能的改善作用及机制22-24

摘要：目的观察三子止咳胶囊对慢性阻塞性肺疾病（COPD）稳定期患者肺功能的改善作用,探讨其可能的作用机制。方法将68例COPD稳定期患者随机分为观察组33例、对照组35例。观察组口服三子止咳胶囊,对照组口服安慰剂,均2粒/次,3次/d,治疗6个月。分别于治疗前及治疗6个月,应用肺功能检测仪检测第1秒用力呼气量（FEV1）、用力肺活量（FVC）、FEV1占预计值百分比（FEV1%pred）,测定患者血清脂联素（APN）、白细胞介素17（IL-17）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）水平。结果与治疗前比较,治疗6个月对照组FVC、FEV_1、FEV1%pred及血清APN、IL-17、MMP-9、TIMP-1水平比较差异无统计学意义（P均？0.05）,观察组以上指标均改善（P均〈0.05）,治疗6个月两组以上指标比较差异有统计学意（P均〈0.05）。结论三子止咳胶囊对COPD稳定期患者的肺功能有改善作用,该作用可能与降低血清APN、IL-17、MMP-9、TIMP-1水平有关。

山东医药杂志基础研究

CAFs及IL-8对裸鼠人卵巢癌移植瘤生长的影响25-27

摘要：目的探讨癌相关成纤维细胞（CAFs）及白细胞介素8（IL-8）对裸鼠卵巢癌生长的促进作用。方法CAFs和成纤维细胞（NFs）原代培养并鉴定,培养人卵巢癌细胞株（OVCAR3细胞）。将10只裸鼠随机分为10组,分别接种NFs、CAFs、OVCAR3、NFs＋OVCAR3、CAFs＋OVCAR3及IL-8（100 ng/m L）干预后的以上细胞,并根据相应接种细胞分组,建立裸鼠皮下移植瘤模型。观察各组成瘤情况,计算肿瘤体积;处死裸鼠,剥离瘤体,HE染色后镜下观察裸鼠荷瘤组织病理变化。结果 NFs组、CAFs组、NFs＋OVCAR3组、CAFs＋IL-8组、NFs＋IL-8组、NFs＋OVCAR3＋IL-8组未见肿瘤生长。OVCAR3＋CAFs＋IL-8组、OVCAR3＋CAFs组、OVCAR3＋IL-8组成瘤体积明显大于OVCAR3组（P均〈0.05）。HE染色镜下见OVCAR3＋CAFs＋IL-8组癌组织恶性程度最高。结论 CAFs、IL-8能在体内促进裸鼠卵巢癌移植瘤的生长。

异丙托溴铵雾化吸入治疗对COPD大鼠肺功能的保护作用及机制27-29

摘要：目的观察异丙托溴铵雾化吸入治疗对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺功能的保护作用,并探讨其作用机制。方法 48只SD大鼠随机均分为模型组、治疗3周组、治疗6周组和对照组,前三组制备COPD大鼠模型,停止熏烟后次日治疗3、6周组予以异丙托溴铵雾化治疗,4 m L/次,2次/d,分别治疗3、6周;对照组经气管插管注入生理盐水200μL。采用BL-420系统记录呼吸曲线计算第0.3 s用力呼气容积（FEV0.3）、FEV0.3占肺活量百分比（FEV0.3/FVC）,用血气分析仪检测血气指标：p H、PaO2、PaCO2,采用ELISA法检测IL-8、IL-10、TNF-α水平。结果与模型组比较,治疗3周组、治疗6周组FEV0.3、FEV0.3/FVC、pH、PaO2、IL-10水平升高,PaCO2、IL-8、TNF-α水平降低（P均〈0.05）,治疗6周组以上指标变化（除PaCO2外）更明显（P均〈0.05）。结论异丙托溴铵雾化吸入治疗后COPD大鼠肺功能得到改善,该作用可能与降低IL-8、TNF-α水平,升高IL-10水平有关。

西沙必利灌胃对氯吡格雷致大鼠胃黏膜损伤的干预作用及机制30-32

摘要：目的观察氯吡格雷对大鼠胃黏膜的损伤作用,并探讨西沙必利对黏膜损伤的影响及机制。方法选取胃溃疡模型制作后溃疡完全愈合大鼠48只,随机分为对照组、氯吡格雷组、西沙必利0.5 mg/kg组、西沙必利0.75 mg/kg组,每组12只。西沙必利两组分别给予0.5、0.75 mg/kg西沙必利灌胃,1 h后与氯吡格雷组大鼠同时再予8.0 mg/kg氯吡格雷灌胃,之后禁食6 h;对照组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,连续灌胃30 d。观察胃黏膜的病理变化,计算溃疡复发率、胃黏膜损伤指数评分和上皮细胞凋亡率;Western blotting法检测胃黏膜组织Caspase-3、NF-κB、Occludin、ZO-1、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达。结果与对照组比较,氯吡格雷组溃疡复发率、胃黏膜损伤指数评分和上皮细胞凋亡率升高,Caspase-3、NF-κB、p-p38、p-ERK蛋白表达水平上调,Occludin、ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。与氯吡格雷组比较,西沙必利两组溃疡复发率、胃黏膜损伤指数评分和上皮细胞凋亡率降低,Caspase-3、NF-κB、p-p38、p-ERK蛋白表达水平下调,Occludin、ZO-1表达水平上升,差异有统计学意义（P均〈0.05）。结论氯吡格雷可致大鼠胃黏膜损伤,西沙必利可抵抗该损伤,其机制可能与p38、ERK蛋白的磷酸化有关。

利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响及机制33-35

摘要：目的探讨利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞钙黏附蛋白E（E-cadherin）、肌动蛋白α（α-SMA）表达的影响及机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）随机分为正常对照组、高糖组、高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组,高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组分别转染siRNA沉默Wnt4、β-catenin,12 h后与高糖组、高糖＋利格列汀组同时加入D-葡萄糖（葡萄糖终浓度为30 mmol/L）,高糖＋利格列汀组同时加入利格列汀（终浓度10μmol/L）,继续培养48 h。采用Western blotting法检测各组E-cadherin、α-SMA、Wnt4、β-catenin蛋白表达,倒置显微镜观察细胞形态学改变,测定细胞长与宽比值。结果与正常对照组比较,高糖组E-cadherin表达下调、α-SMA、Wnt4、β-catenin表达上调（P均〈0.05）;与高糖组比较,高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组E-cadherin表达上调、α-SMA表达下调（P均〈0.05）。高糖组细胞由卵圆形伸长呈梭形,高糖＋利格列汀组细胞由卵圆形向梭形改变程度减轻。高糖组细胞长/宽较正常对照组、高糖＋利格列汀组升高（P均〈0.05）。结论利格列汀可部分抑制体外高糖诱导的人肾小管上皮细胞E-cadherin表达下调、α-SMA表达上调,其机制可能与Wnt4/β-catenin通路有关。

四君子汤对肠梗阻解除后大鼠血清DAO及小肠组织MDA、SCF表达的影响35-37

摘要：目的探讨四君子汤对肠梗阻解除后大鼠血清二胺氧化酶（DAO）及小肠组织丙二醛（MDA）、干细胞因子（SCF）表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为假手术（C）组10只、造模组50只。制作肠梗阻模型后造模组再随机均分为模型（M）组、梗阻解除48 h自然恢复48 h（R1）组、梗阻解除48 h自然恢复96 h（R2）组、梗阻解除48 h四君子汤治疗48 h（S1）组、梗阻解除48 h四君子汤治疗96 h（S2）组。造模组造模48 h解除小肠机械性梗阻。S1、S2组四君子汤灌胃,每次1 m L/100 g,2次/d;C组及R1、R2组给予等体积生理盐水灌胃。各组各自干预后即刻取下腔静脉血分离血清,取梗阻近端小肠组织。采用ELISA法检测血清DAO及小肠组织MDA,采用RT-PCR法检测小肠组织SCF mRNA表达。结果与M组比较,S1组、S2组血清DAO水平、小肠组织MDA及SCF mRNA表达降低,且S2组小肠组织MDA及SCF mRNA表达降低更明显（P均〈0.05）。结论肠梗阻解除后大鼠应用四君子汤后血清DAO及小肠组织MDA、SCF表达降低。

山东医药杂志临床研究

食管癌患者放疗中容积旋转调强与静态调强对计划靶区及危及器官受照剂量的影响38-40

摘要：摘要：目的探讨胸段食管癌放疗中容积旋转调强（VMAT）和静态调强（IMRT）对计划靶区（PrrV）及危及器官受照剂量的影响。方法选取食管癌患者30例，每例患者分别设计360度双弧VMAT和5野固定角度IMRT两种不同的放疗计划，用剂量体积直方图测算PTV受照剂量、适形指数（CI）、剂量不均匀指数（HI），心肺受照剂量用Vx表示（接受X Gy照射的体积占整个器官照射体积的百分比），记录脊髓受照最大剂量（Dmax）、平均剂量（Dmean）、最小剂量（Dmin）。结果VMAT与IMRT的CI比较差异有统计学意义（P〈0．05），HI及胛V最大、最小、平均剂量二者比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。心脏受照剂量二者在V10、V15、V20、V30、V40、V50比较差异有统计学意义（P均〈0．05），肺受照剂量在V5方面IMRT优于VMAT（P〈0．05），但在高剂量区V25、V30、V40、V50 IMRT均高于VMAT（P均〈0．05）。脊髓的Dmax、Dmean两者比较差异均无统计学意义（P均〉0．05），但Dmin VMAT明显优于IMRT（P〈0．05）。结论在胸段食管癌放疗中，VMAT和IMRT的PTV照射剂量差异不大，对心肺、脊髓等重要危及器官的照射剂量VMAT少于IMRT。

鼻咽癌组织中BLU/ZMYND10α蛋白的表达变化及意义40-42

摘要：目的探讨BLU／ZMYND10α蛋白在人鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌发生发展的关系。方法选取鼻咽癌蜡块标本90例（其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮）和正常鼻咽黏膜组织蜡块标本18例，采用组织微阵列技术结合免疫组化法检测标本中BLU／ZMYDD10α蛋白表达，分析BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。结果鼻咽癌组织中BLU／ZMYDD10α蛋白阳性表达率低于癌旁正常鼻咽上皮组织、正常鼻咽上皮组织（P均〈0．05），鼻咽癌组织BLU／ZMYDD10α蛋白在细胞核伴或不伴细胞质阳性表达率低于正常鼻咽上皮组织和癌旁正常鼻咽上皮组织（P均〈0．05）。鼻咽癌组织中BLU／ZMYND10α蛋白表达与患者性别、肿瘤组织学分类、淋巴结转移和TNM分期无关（P均〉0．05）。结论BLU／ZMYND10α蛋白在鼻咽癌组织中呈低表达，其低表达可能促进鼻咽癌的发生。

CT灌注成像对化疗后非小细胞肺癌患者肿瘤组织血流变化的评价43-44

摘要：目的探讨CT灌注成像在化疗后非小细胞肺癌患者早期血流变化评价中的应用价值。方法选择非小细胞肺癌患者30例,均给予标准化疗＋恩度方案,21 d为1个周期,分别于化疗前及化疗1、3个周期行CT灌注成像检查,记录CT灌注成像参数：血容量（BV）、血流量（BF）、表面渗透性（PS）、到达峰值时间（TTP）、平均通过时间（MTT）。应用Vitrea4.1 Lung Nodule Analysis软件计算肿瘤体积（TV）。结果 30例患者化疗1个周期,部分缓解（PR）18例、稳定（SD）10例、进展（PD）2例;化疗3个周期,PR 24例、SD 5例、PD 1例。化疗1、3个周期BF、PS、MTT及TV与化疗前比较差异有统计学意义（P均〈0.05）,且化疗3个周期患者以上指标变化更明显。结论CT灌注成像能够反映非小细胞肺癌患者化疗早期血流变化情况,并可预测肿瘤对治疗的反应。

手术联合化疗对膀胱癌患者外周血CD4＋ CD25＋ CD127（low）/-Treg计数的影响45-46

摘要：目的探讨经尿道手术联合表柔比星膀胱灌注化疗对浅表性膀胱癌患者外周血CD4＋CD25＋CD127（low）/-调节性T细胞（Treg）计数的影响。方法选择浅表性膀胱癌患者58例作为观察组（仅行手术治疗9例、行手术＋化疗治疗49例）、20例健康体检者作为对照组,采用三色免疫荧光标记法及流式细胞术检测两组外周血CD4＋CD25＋CD127（low）/-Treg计数。结果与对照组比较,术前观察组外周血CD4＋CD25＋CD127（low）/-Treg计数升高（P〈0.05）。与术前比较,术后第1天、1周观察组外周血CD4＋CD25＋CD127（low）/-Treg计数降低（P均〈0.05）,且手术＋化疗患者降低更明显（P均〈0.05）。结论浅表性膀胱癌患者外周血CD4＋CD25＋CD127（low）/-Treg计数升高,经尿道手术联合表柔比星膀胱灌注化疗可降低其计数。

清脑益智颗粒治疗小血管性轻度认知功能障碍的效果及作用机制47-49

摘要：目的探讨清脑益智颗粒对小血管性轻度认知功能障碍（sv MCI）的临床疗效,并从氧化应激角度探讨其作用机制。方法采用随机双盲法将收治的60例sv MCI患者分为治疗组和对照组各30例。治疗组口服清脑益智颗粒10 g、3次/d,对照组口服尼莫地平片30 mg、3次/d,两组疗程均3个月。评价两组治疗前后简易精神状态检查量表（MMSE）、临床记忆量表（CMS）及中医证候积分,并检测两组用药前后血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乙酰胆碱酯酶（Ach E）的水平。结果治疗3个月,治疗组MMSE、CMS积分较对照组均提高（P均〈0.01）,其中记忆能力、语言及执行功能明显改善（P均〈0.01）;治疗组中医证候积分较对照组明显降低（P均〈0.01）;治疗组血清MDA、Ach E水平较对照组下降,而SOD水平升高（P均〈0.01）。结论清脑益智颗粒能够安全、有效改善sv MCI患者（痰瘀阻窍型）的认知能力和伴随症状;增强机体抗氧化应激能力、减轻自由基对组织细胞的损伤破坏可能是其临床有效的作用机制之一。