Cx43基因shRNA慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用
摘要：摘要：目的构建缝隙连接蛋白（Cx）43基因shRNA慢病毒载体，并检测其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用。方法针对Cx43基因序列，设计RNA干扰靶点序列，合成靶序列的双链DNA，接人pGCL—Gyp载体，挑选阳性克隆行PCR鉴定及测序。用pHelperl．0和pHelper2．0质粒转染293T细胞，包装产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的细胞数量计算病毒滴度；以最适感染复数感染大鼠心肌细胞，通过荧光显微镜观察感染效率；应用real—timePCR和Westernblot法检测大鼠心肌细胞Cx43mRNA及Cx43蛋白表达，并评价其抑制效果。结果经PCR鉴定和测序证实，Cx43慢病毒载体构建正确，其病毒滴度为8×10。TU／mL、转染效率为82．59％。荧光定量real—timePCR法检测Cx43mRNA的抑制率为96．10％，Westernblot法检测Cx43蛋白的抑制率为77．16％。结论成功构建了Cx43基因shRNA慢病毒载体，其能显著抑制大鼠心肌细胞Cx43基因的表达。不同浓度肿瘤坏死因子-α对肺腺癌A549细胞的影响
摘要：摘要：目的观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对肺腺癌A549细胞产生的保护、促炎、促细胞凋亡效应。方法分别以0、1、10、25、50ng／mL的TNF-α诱导肺腺癌A549细胞6h。采用MTY比色法观察细胞存活率；应用活性氧（ROS）荧光探针DCFH—DA检测ROS强度；RT—PCR法检测Nrf-2、NF-KB基因的表达；DAPI细胞核荧光染色法处理细胞，荧光显微镜下观察细胞凋亡。结果0、1、10、25、50ng／mLTNF-α对肺腺癌A549细胞存活率无影响（P均〉0．05）；100ng／mLTNF-α诱导后，与对照组比较，细胞存活率降低（P〈0．05）。随着TNF．仅浓度增加，肺腺癌A549细胞产生ROS的量随之增加（P均〈0．05），Nrf-2mRNA表达减少（P均〈0．05），NF-KBmRNA表达增加（P均〈0．05），细胞凋亡率有上升趋势。结论不同浓度TNF-α诱导肺腺癌A549细胞可产生保护、促炎、促细胞凋亡等不同细胞效应，且随TNF-α浓度增加，细胞损伤加重；其机制可能与ROS产生的量有关。三水白虎汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖的蛋白质组学影响
摘要：摘要：目的探讨三水白虎汤（SSBH）对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖的蛋白质组学影响。方法组织块培养法收集RA患者的关节FLS，体外传代培养，取3～6代细胞，分别加入SSBH含药血清培养（SSBH组）及加入生理盐水制备的血清培养（对照组）。培养72h后提取细胞总蛋白，用双向凝胶电泳（2-DE）分离细胞总蛋白，凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白位点；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对差异蛋白位点进行鉴定。结果两组FLS蛋白2-DE图谱均出现差异蛋白质点。在差异蛋白表达量超过3倍的蛋白质点中，选取27个差异蛋白位点进行质谱分析，共鉴定出包括表达上升的IL-1受体拮抗蛋白等25种蛋白质。结论SSBH可能通过上调RA患者FLS中IL-1受体拮抗蛋白来抑制滑膜增生，这可能是该方剂治疗RA的药理作用机制之一。节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响
摘要：摘要：目的探讨节律基因Bmall对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响。方法构建针对Bmall序列的shRNA，用脂质体介导转染人胃癌细胞BGC-823，G418筛选稳定细胞株（转染组），同时设对照组（空白组）。用克隆形成率检测细胞生长，用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期，RT—PCR及Westernblot法检测相关基因及蛋白表达。结果转染组克隆形成率低于对照组（P〈0．05）。与对照组比较，转染组Bmall总凋亡率升高（P〈0．05），其细胞周期再分布出现G1期缩短（P〈0．05），G2期延长（P〈0．05），同时发现Bcl-2mRNA表达下调（P〈0．05），C-MycmRNA表达上调（P〈0．05）。结论Bmall可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖，促进细胞凋亡，有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点。四种海螺中左卡尼汀及其酰化物含量比较
摘要：摘要：目的比较斑玉螺、疣荔枝螺、海螺、钝拟蟹守螺中左卡尼汀（LC）及其代谢产生的酰化物乙酰左卡尼汀（ALC）和丙酰左卡尼汀（PLC）的含量。方法海螺样品以3倍量的3％高氯酸匀浆提取后，用1一氨基蒽衍生化，荧光衍生化高效液相色谱法（HPLC）检测各种海螺中LC、ALC、PLC含量。结果荧光衍生化HPLC精密度〈4％、回收率96％～103％、稳定性〈3．8％，均满足方法学要求。4种海螺中LC、ALC、PLC含量：Lc：钝拟蟹守螺〉疣荔枝螺〉斑玉螺〉海螺；ALC：钝拟蟹守螺〉疣荔枝螺〉斑玉螺〉海螺；PLC：钝拟蟹守螺〉斑玉螺〉海螺〉疣荔枝螺。结论4种海螺中均能检测出LC、ALC、PLC，以钝拟蟹守螺中含量最高。脑动脉瘤壁和脑胶质瘤组织中TGF—β1及VEGF的表达及意义
摘要：摘要：目的观察人脑动脉瘤壁和脑胶质瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子-β1（TGF—β1）的表达，并分析其意义。方法选择脑动脉瘤患者15例、脑胶质瘤患者15例及正常脑动脉的颅脑外伤患者2例，用免疫组织化学方法检测不同标本VEGF及TGF—β1的表达。结果TGF—β1和VEGF在脑动脉瘤壁、脑胶质瘤组织中的阳性表达高于正常脑动脉壁或脑组织（P均〈0．05）。结论脑动脉瘤壁和脑胶质瘤组织中TGF—β1、VEGF阳性表达较高，正常脑动脉壁或脑组织中几乎不表达；TGF—β和VEGF在血管壁获得性损害过程中起了重要作用，并与脑动脉瘤和脑胶质瘤的形成有关。泰山白首乌的急性毒性和遗传毒性分析
摘要：摘要：目的探讨泰山自首乌的急性毒性和遗传毒性。方法制备泰山自首乌药液，按最大耐受量法进行大鼠急性经口毒性试验；用5000、1000、200、40和8μg／皿5个剂量进行Ames试验；用8000、5000、2500mg／kg3个剂量进行小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸变试验。结果泰山白首乌药液对大鼠的LD50大于16．0g／kg；三项遗传毒性试验结果均为阴性。结论泰山自首乌属无毒级，未发现遗传毒性。铜负荷大鼠脑组织Cu、Zn、Fe分布及其对神经元细胞损伤的机制
摘要：摘要：目的观察铜负荷大鼠不同脑区脑组织Cu、Zn、Fe分布，并探讨其对神经元细胞损伤的机制。方法选择雄性Wistar大鼠50只，随机均分模型组和对照组，模型组给予含硫酸铜1g／kg的粉状饲料和0．185％硫酸铜水，对照组正常喂饲。第12周结束时，取血、脑组织标本，检测血和不同脑区Cu、Zn、Fe及Cu／Zn．SOD、MDA含量。结果模型组各脑区脑组织Cu含量均较对照组明显升高（P均〈0．05），Zn、Fe含量无明显变化；血清、大脑皮层及基底节区Cu／Zn—SOD活力均较对照组减低（P均〈0．05），MDA含量均较对照组明显升高（P均〈0．05）。结论Cu负荷大鼠脑组织Cu含量明显增高，其对神经元细胞的损伤可能与Cu／Zn—SOD活力减低、MDA含量升高有关。替米沙坦对自发性高血压大鼠反复正加速度暴露后靶器官的影响
摘要：摘要：目的探讨替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）反复正加速度（＋Gz）暴露后靶器官（心、脑、肾、主动脉）的影响。方法将SHR28只随机分成4组；WistarKyoto大鼠（WKY）14只随机分为2组；每组7只。分别为替米沙坦治疗SHR＋Gz暴露组（TF-SHR＋Gz组）、替米沙坦治疗SHR对照组（1Tr—SHR—C组）、SHR＋Gz暴露组（SHR＋Gz组）、SHR对照组（SHR—C组）、WKY＋Gz暴露组（WKY＋Gz组）、WKY对照组（WKY—C组）。替米沙坦治疗SHR在进行＋Gz暴露前后给予替米沙坦30mg／（kg·d）灌胃，将大鼠血压控制在正常范围内。＋Gz暴露采取模拟空战动作模式连续进行＋5、＋9、＋5、＋9、＋5和＋9Gz／10s暴露，G作用总时间94s，G增长率为1G／s。休息20min后，再按上述模式重复暴露1次，连续暴露7d。对照组不进行离心机暴露。所有大鼠在实验结束后立即采集心、脑、肾、主动脉标本，进行HE染色光镜观察，并对左心室心肌肥厚指数（LVMI）进行测量。结果替米沙坦治疗SHR的LVMI与WKY无明显差异（P〉0．05），而未服药SHRLVMI明显高于WKY（P〈0．01）。光镜观察替米沙坦治疗SHR组及WKY组大鼠靶器官未见明显组织学损害表现；未服药SHR存在心肌、肾脏、大脑皮层损害表现，SHR＋Gz组损害程度重于SHR—C组。结论替米沙坦可以有效逆转SHR靶器官早期损害，在血压控制正常基础上进行反复＋Gz暴露并不加重SHR靶器官损害程度。人外周血单核细胞经体外诱导向淋巴管内皮细胞分化的实验研究
摘要：摘要：目的探讨人外周血单核细胞经体外诱导能否向淋巴管内皮细胞分化。方法从健康人外周血分离单个核细胞，经贴壁法获取单核细胞，用内皮细胞培养基EGM．2和体外诱导培养单核细胞，分别用免疫荧光细胞化学染色法、RT—PCR及流式细胞术检测单核细胞对淋巴管内皮标志物VEGFR一3、Podoplanin、LYVE-1、Prox·1和内皮共同标志物vWF、VEGFR-2的表达。结果经过诱导培养后的细胞呈纺锤形或多角形，表达VEGFR-3、LYVE·1、Prox-1、Podoplanin和vWF，弱表达或者不表达VEGFR-2。结论人外周血来源的单核细胞经体外诱导培养可分化为淋巴管内皮样细胞。虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护作用
摘要：摘要：目的探讨虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护机制。方法取SD大鼠10只，采用0．125％的胰酶分离其海马神经元细胞并进行原代培养。对照组在海马神经元细胞中加入5mmol／LB样淀粉蛋白（Aβ）25-35，诱导24h，建立AD模型；治疗组在海马神经元细胞中分别加入虾青素5、10、20t,g／IxL，然后均加入5mmol／L的Aβ25-35，诱导24h。采用噻唑蓝比色法检测各组海马神经元细胞的存活情况，RT—PCR、Westernblot法分别检测细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、淀粉样前体蛋白（APP）、β-分泌酶、γ-分泌酶的基因及蛋白表达，半自动生化仪检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）及脂质过氧化物（MDA）。结果随着虾青素浓度升高，海马神经元细胞的存活率、SOD活性明显升高（P〈0．05或〈0．01），MDA降低（P〈0．05），HIF-1α、APP、β-分泌酶、叮一分泌酶mRNA表达及蛋白表达明显降低（P〈0．01或〈0．05）。结论虾青素通过抑制大鼠海马神经元细胞HIF-1α、β-分泌酶、γ-分泌酶、APP表达，减少A13合成，从而对其细胞起到保护作用。子宫内膜癌组织中过氧化物酶体增生物激活受体γ的表达及意义
摘要：摘要：目的观察子宫内膜癌组织中过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPARγ）的表达，并分析其意义。方法采用免疫组化技术检测40份子宫内膜癌组织及其癌旁组织、30份正常子宫内膜组织中PPARγ的表达情况，分析其与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。结果PPARγ在子宫内膜癌中的阳性表达率为67．50％，显著高于正常子宫内膜（13.33％）及癌旁组织（17．50％）（P均〈0．01）。子宫内膜癌组织中PPARγ阳性表达与肿瘤组织学分级、FIGO分期有关（P均〈0．05）。结论子宫内膜癌组织中PPA脚过表达；检测其表达可能对子宫内膜癌的诊断有一定价值。99mTcO4-甲状腺显像对不同时期亚急性甲状腺炎的诊断价值
摘要：摘要：目的探讨放射性核素99TcO4-甲状腺显像对不同时期亚急性甲状腺炎（SAT）的诊断价值。方法选择SAT患者155例，按甲状腺功能分为甲状腺功能亢进（甲亢）组77例、甲状腺功能正常组78例。分别行甲状腺99TcO4-显像和细针穿刺细胞学检查（FNAB），以FNAB结果为参照，观察99TcO4-甲状腺显像诊断不同时期SAT的灵敏度和特异度。结果99TcO4-甲状腺显像诊断甲亢组的灵敏度为91．7％、特异度为60．O％，与FNAB检查比较差异有统计学意义（r=12．8，P〈0．05）；诊断甲状腺功能正常组的灵敏度为76．1％、特异度为57．1％，与FNAB检查比较差异无统计学意义（X2=2．0，P〉0．05）。结论99TcO4-甲状腺显像诊断甲亢期SAT敏感性和特异性均高于甲状腺功能正常期，可考虑作为首选方法。血清降钙素原、C反应蛋白对尿路感染的诊断价值
摘要：摘要：目的探讨血清降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）对尿路感染的诊断价值。方法选择上尿路感染患者42例、下尿路感染患者39例，另选取无尿路感染症状的健康查体者45例作为对照组。分别观察各组血清PCT、CRP水平，同时计数血液及尿液中的白细胞。根据培养鉴定结果将上尿路感染组、下尿路感染组再次分为革兰阳性菌感染组、革兰阴性菌感染组和真菌感染组，并对上述指标进行比较。结果上、下尿路感染组血清PCT、CRP及血、尿液WBC明显高于对照组（P均〈0．05）。在上、下尿路感染中PCT为0．05ng／mL时，对尿路感染检测的敏感性为89．7％，特异性为79．6％；CRP为5mg／L时，敏感性、特异性分别为79．3％、64．3％。革兰阳性菌感染组、革兰阴性菌感染组和真菌感染组4项指标比较差异均无统计学意义。结论血清PCT、CRP可作为诊断尿路感染的有效指标，但PCT更敏感，并可用于辅助鉴别尿路感染部位。系统性红斑狼疮患者外周血中OX40、OX40L mRNA的表达及意义
摘要：摘要：目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中OX40、OX40LmRNA的表达及意义。方法采用RT．PCR法检测30例SLE患者（活动期15例、非活动期15例）及15例健康体检者外周血单个核细胞中OX40、OX40LmRNA表达。结果活动期SLE患者外周血单个核细胞OX40、OX40LmRNA的表达水平高于非活动期SLE患者和健康体检者（P均〈0．05）。相关分析显示，OX40mRNA的表达水平与SLE疾病活动指数呈正相关（r=0．35，P〈0．05）。结论SLE患者外周血中OX40、OX40LmRNA的表达水平上调，可能在SLE发生、发展中起一定作用。剑突下小切口辅助克氏针固定在婴幼儿漏斗胸矫治修复中的应用价值
摘要：摘要：目的探讨剑突下小切口辅助克氏针内固定在婴幼儿漏斗胸矫治修复中的应用价值。方法选择漏斗胸婴幼儿50例，通过剑突下小切口辅助克氏针固定行改良NUSS手术，观察其手术效果及并发症情况。结果50例患儿均顺利完成手术，手术时间30—50min，术中出血量（10±3）mL；术后早期并发气胸1例、肋间血管损伤2例，采用相应处理治愈，无晚期术后并发症。术后住院（6．0±1．5）d，随访3～24个月，胸廓畸形矫正满意。结论剑突下小切口辅助克氏针内固定在婴幼儿漏斗胸矫治修复中安全可行，矫形效果较好。硝黄汤鼻饲联合灌肠治疗急性加重期COPD患者肠屏障功能障碍的疗效及安全性
摘要：摘要：目的探讨硝黄汤鼻饲联合灌肠治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肠屏障功能障碍的疗效及安全性。方法选择80例急性加重期COPD肠屏障功能障碍患者，随机均分为观察组、对照组。对照组给予常规治疗，观察组在对照组基础上，给予硝黄汤鼻饲联合灌肠治疗。观察两组临床疗效，并比较其治疗前及治疗1、3、5d肠鸣音、APACHEII评分、二胺氧化酶（DAO）、肠脂肪酸结合蛋白（IFABP）、内毒素水平及住ICU时间。结果观察组临床控制率明显高于对照组（P〈0．01）。两组治疗前肠鸣音、APACHEII评分、DAO、IFABP及内毒素水平比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）；治疗3、5d，观察组的APACHEl／评分、DAO、IFABP及内毒素水平明显低于对照组同期（P均〈0．05），肠鸣音较对照组同期明显增加（P〈0．05）。两组住ICU时间、病死率比较差异无统计学意义（P均〉0．05），但观察组机械通气时间明显短于对照组（P〈0．05）。两组治疗前后动脉血气分析及肝肾功能指标比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论硝黄汤鼻饲联合灌肠能改善急性加重期COPD患者肠屏障功能障碍。‘胫后静脉置管溶栓治疗急性下肢深静脉血栓形成的疗效观察
摘要：摘要：目的观察胫后静脉置管溶栓治疗急性下肢深静脉血栓形成（DVT）的临床疗效。方法选择37例急性DVT患者，在超声引导下经患肢胫后静脉穿刺，置入溶栓导管至髂、股、胭静脉血栓进行溶栓治疗，并分析其临床疗效。结果溶栓治疗后，患者患、健侧大腿及小腿周径差均明显小于溶栓前（P均〈0．01）；患肢大腿消肿率为（89．74±7．16）％，小腿消肿率为（86．74±7．57）％。溶栓后静脉通畅评分明显高于溶栓前（P〈0．01），溶栓后静脉平均通畅率为（75．34±7．36）％。患者均未发生严重并发症。对33例患者随访5～12个月，均无血栓再发。结论胫后静脉置管溶栓是治疗急性DVT安全、有效的方法。
