GST-hPlk2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
摘要：目的构建GST-hPlk2融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌（E.coli）中诱导表达。方法从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hPlk2基因全长,通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hPlk2,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,通过限制性内切酶酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-hPlk2,并用Western blot方法证实了GST-hPlk2融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hPlk2原核表达载体,并证实了其在原核细胞E.coli中的表达,为进一步纯化Plk2及研究其结构与功能提供了前提基础。胃乐散对大鼠溃疡组织TXA_2、PGI_2及COX-2含量的影响及意义
摘要：目的观察胃乐散对大鼠实验性溃疡血栓素A2（TXA2）和前列腺素I2（PGI2）及环氧合酶2（COX-2）的影响,并探讨其作用机理。方法 SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、胃乐散低剂量组、胃乐散中剂量组、胃乐散高剂量组和雷尼替丁组。采用冰醋酸烧灼法制备大鼠胃溃疡模型,连续用药后第14天处死大鼠,取溃疡部位组织提取蛋白。用ELISA法检测组织中血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）的水平变化,并观察TXB2/6-Keto-PGF1α的比值变化。Western blot检测组织中COX-2的含量。结果与正常对照组比较,模型组6-Keto-PGF1α、COX-2水平降低（P〈0.05）,TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α升高（P〈0.05）;胃乐散高剂量组6-Keto-PGF1α的含量高于正常对照组（P〈0.05）。与模型组比较,胃乐散中、高剂量组及雷尼替丁组6-Keto-PGF1α、COX-2的含量增加,特别是胃乐散高剂量组增加更为明显（P〈0.01）,胃乐散高剂量组及雷尼替丁组TXB2低于模型组（P〈0.05）,特别是TXB2/6-Keto-PGF1α降低更为显著（P〈0.01）。结论胃乐散治疗胃溃疡可能是通过促进PGI2分泌,纠正TXA2/PGI2的失衡来实现的。Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞增殖及细胞周期的抑制作用
摘要：目的测定Pin1抑制剂（Juglone）对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长增殖及细胞周期的影响,讨论Ju-glone的抗鼻咽癌肿瘤的作用效果。方法体外培养人鼻咽癌CNE-2Z细胞,采用MTT实验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期。结果 MTT测定结果显示,Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和作用浓度的升高,其抑制作用也逐渐增强;流式细胞仪分析检测结果显示,加入Juglone培养24 h后造成CNE-2Z细胞G1期阻滞,48 h后,CNE-2Z细胞G2/M期阻滞（P〈0.01）。结论 Juglone有抑制鼻咽癌细胞增殖和细胞周期阻滞的作用,有望为鼻咽癌防治提供候选药物。皮质醇增多症围手术期激素替代治疗方案的探讨
摘要：目的探讨皮质醇增多症围手术期激素替代治疗新方案及效果。方法术前确诊的34例皮质醇增多症患者围手术期采用简化激素替代方案：术前不用激素,术中静滴氢化可的松100 mg,术后当天、第1天和第2天分别静滴氢化可的松100 mg（每12 h 1次）、100 mg（每12 h 1次）和100 mg,从第2天开始口服强的松10 mg（3次/d）,每7天减量至5 mg开始维持治疗。术后密切观察临床症状,并间断检测血皮质醇、尿皮质醇来评价该激素替代治疗方案及效果。结果所有患者围手术期未出现肾上腺皮质功能不全症状。尿皮质醇术后第1、2天较术前升高（P〈0.05）;术后第6天明显回落,但与术前相比略降低,差异无统计学意义;第7天较术前明显降低（P〈0.05）。血皮质醇术后第1天与术前相比稍有回落,但是差异无统计学意义;第2、6、7天较术前降低（P均〈0.05）。结论该治疗方案简化了用药方案,安全可行,是皮质醇增多症围手术期激素替代治疗的一种实用方案。SOX10对胶质瘤细胞增殖及去分化的影响
摘要：目的探讨SOX10过表达对胶质瘤细胞增殖和去分化的影响。方法胶质瘤细胞株U87转染SOX10腺病毒48 h后收集细胞进行MTT、流式细胞术、Western blot和Q-RT-PCR。结果 U87细胞感染SOX10过表达腺病毒后细胞的增殖受抑制,DNA合成减少,S期细胞数减少,干细胞标志CD133上调。结论 SOX10可能在胶质瘤细胞的去分化中起重要作用。扩散张量成像及扩散张量纤维束成像在颅脑肿瘤诊断中的应用价值
摘要：目的探讨磁共振扩散张量成像（DTI）及纤维束成像（DTT）在星形细胞瘤、脑膜瘤与转移瘤肿瘤实质区的应用价值,通过对表观扩散系数（ADC）及各向异性分数（FA）的测量分析,观察脑白质与纤维束的关系,为临床提供有价值的信息。方法对32例经病理证实的脑肿瘤患者,其中不同级别星形细胞瘤12例、良性脑膜瘤10例、转移瘤10例,分别测量肿瘤实质区与对应区正常脑组织的平均ADC值和FA值,分析其ADC值和FA值的差异并观察3种脑肿瘤对白质纤维束的影响。结果星形细胞瘤、脑膜瘤或转移瘤患者组内肿瘤实质区与对侧正常脑组织FA值差异有统计学意义（P〈0.05）,星形细胞瘤、脑膜瘤、转移瘤患者肿瘤实质区的FA值分别为0.07±0.03、0.14±0.05、0.16±0.07,P〈0.05。星形细胞瘤及转移瘤患者肿瘤实质区ADC值较对侧正常脑组织高（P〈0.05）;脑膜瘤患者肿瘤实质区ADC值与对侧正常部位无显著性差异（P〉0.05）;星形细胞瘤、脑膜瘤和转移瘤患者肿瘤实质区ADC值差异有统计学意义（P〈0.05）。在DTT图中星形细胞瘤和转移瘤多数表现为纤维束部分中断、受压、偏移或变形移位;脑膜瘤纤维束呈现为稀疏,移位。结论测量肿瘤实质区ADC值及FA值可用于鉴别脑内和脑外的肿瘤,如星形细胞瘤与脑膜瘤的鉴别或转移瘤与脑膜瘤的鉴别,其中ADC值有显著的鉴别意义;DTT可清晰显示正常白质纤维束和肿瘤的解剖关系,有利于术前方案的制定。透析管路导致首次使用综合征1例
摘要：患者男,59岁,于2011年3月18日以＂痛风性肾病、慢性肾功能不全、尿毒症期＂来我院行血液透析。2009年曾诊断慢性肾功能不全、氮质血症期,予以低蛋白饮食、控制血压和降低血尿酸等非透析治疗,间断出现皮肤瘙痒。3月18日第1次血液透析中使用一次性透析器及管路,罗汉果甜苷对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的保护作用
摘要：目的研究罗汉果甜苷对大鼠肝纤维化的保护作用。方法除正常组外,其余各组采用四氯化碳（CCL4）诱导肝纤维化模型,于造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药,疗程6周。实验结束后,观察罗汉果甜苷对大鼠血清ALT、AST活性,HA、PⅢP、CⅣ含量,肝组织SOD活性及MDA含量的影响,观察罗汉果甜苷对肝组织转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响及对肝组织病理变化的影响。结果罗汉果甜苷各剂量组能明显降低肝纤维化大鼠ALT、AST、MDA、CⅣ、PⅢNP含量,升高SOD水平,减轻肝组织病理损伤程度,抑制肝组织中TGF-β1表达。结论罗汉果甜苷对CCL4诱导的肝纤维化大鼠有很好的保护作用。脉络宁硬膜外自控式注射配合手法治疗腰椎间盘突出症
摘要：目的探索脉络宁硬膜外腔自控式注射配合推拿牵引等手法综合治疗腰椎间盘突出症（LIDH）的疗效。方法选择符合纳入标准的LIDH患者156例,随机将患者分为4组：推拿牵引手法治疗组（TMM组,n=38）、脉络宁硬膜外注射＋手法治疗组（MET组,n=40）、脉络宁硬膜外自控式注射＋手法治疗组（MPT组,n=36）及西药硬膜外自控式注射＋手法治疗组（WPT组,n=42）。分别记录4组治疗前与每个疗程后1 d、总疗程后1个月的疼痛视觉模拟评分（VAS）值;记录治疗前和治疗后1、3个月Oswestry功能障碍指数（ODI）分值,进行ODI疗效评价,并计算优良率及有效率。结果 MET、MPT、WPT 3组患者每个疗程结束后1 d及总疗程后1个月进行VAS值测定均比TMM组降低（P〈0.01或〈0.05）,治疗后1、3个月临床疗效评定有效率及优良率均优于TMM组（P〈0.01或〈0.05）,但MPT、WPT组更佳（P〈0.01）,且疗效稳定。结论脉络宁硬膜外自控式注射配合推拿牵引等手法治疗LIDH,可使治疗周期缩短、避免多次应用类固醇激素药,且疗效稳定,该方法是其他保守疗法效果不佳又惧怕手术的LIDH患者的一种良好选择。踝关节骨折畸形愈合的临床治疗
摘要：目的探讨踝关节骨折畸形愈合的术前评估、手术方法及其临床疗效。方法 2004年6月～2011年3月,共收治踝关节骨折畸形愈合患者16例。15例患者MRI检查关节软骨损伤小于Ⅳ级,行切开截骨矫形,应用内固定加外固定支架联合固定;1例患者关节软骨损伤为Ⅳ级,行踝关节融合术。结果 16例患者均获随访,随访时间6～87个月、平均30.8个月。骨折愈合时间12～17周、平均13.2周。术后踝关节AOFAS评分为58～92分、平均82分,优良率为81.3%。术后无深部感染、内固定失效、骨不连、畸形复发等并发症发生。其中2例患者发生皮缘坏死,1例钉道表浅感染,且经对症处理后获痊愈。结论 MRI检查有助于评估关节软骨的损伤程度,确定手术方案,对关节软骨损伤小于Ⅳ级的患者,经截骨矫形后,应用内固定加外固定支架联合固定为一种有效的治疗方式。全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响
摘要：目的本研究探讨全硫代反义寡核苷酸（PS-ASODN）对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响。方法本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸（PS-SODN）组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响。结果终浓度为1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著（P〈0.01）,并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性。1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24 h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力（P〈0.01）。结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现。非诺贝特联合顺铂对A549细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响
摘要：目的探索过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特联合顺铂对人肺癌A459细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响。方法在体外分别采取单用非诺贝特,顺铂及两者联合干预A549细胞48 h后,MTT比色法检测非诺贝特联合顺铂对A549细胞增殖的影响,细胞划痕实验和侵袭小室法检测对A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR和Western blot实验检测上皮—间质转化相关因子E-cadherin的表达变化。结果与阴性对照组相比,非诺贝特和顺铂单用与联合均能抑制A549细胞的增殖,减弱A549细胞的迁移侵袭运动能力,同时上调E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达,其联合组的效果优于单用组（P〈0.05）。结论非诺贝特联用顺铂能够抑制A549细胞的生长,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力,阻止A549细胞发生上皮—间质转化,其机制可能与增加E-cadherin的水平相关。P27~（Kip1）蛋白在胃癌组织中的表达及其与病理分期的关系
摘要：目的研究P27Kip1蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理分期的关系,探讨P27Kip1的表达对胃癌生长和转移的影响。方法采用Western blot方法测定胃癌组织及部分正常组织中P27Kip1蛋白表达,并与手术后病理结果对照分析。结果 68例胃癌肿瘤组织P27Kip1蛋白显示低表达,有淋巴结转移、有浆膜侵犯的胃癌P27Kip1表达明显低于无淋巴结转移、无浆膜侵犯的组织。肿瘤组织P27Kip1表达与淋巴结转移、浆膜侵犯、临床病理分期等相关（P〈0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关（P〉0.05）。结论肿瘤组织P27Kip1表达在胃癌生长、浸润、转移中发挥着重要作用。吡咯烷二硫代氨基甲酸对大鼠急性肺损伤TNF-α的影响
摘要：目的探讨核因子-κB（NF-κB）抑制剂（吡咯烷二硫代氨基甲酸,PDTC）在脂多糖（LPS）所致大鼠急性肺损伤（ALI）中对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法雄性大鼠66只,随机分3组。对照组（N组）6只,腹腔注射生理盐水3 mL/kg;ALI组（L组）30只,腹腔注射LPS 3 mg/kg;PDTC干预组（P＋L组）30只,先腹腔注射PDTC120 mg/kg,半小时后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8、12 h作为观测时间点。观察肺组织匀浆及血浆中TNF-α的变化。结果 L组各时相肺组织匀浆及血浆中TNF-α较N组升高（P〈0.01）,且以2 h组升高最为显著,但P＋L组TNF-α与L组比较减少（P〈0.05）。结论 LPS引起肺组织和血中TNF-α大量释放,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中起重要作用。PDTC通过调控炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。烧伤应激对大鼠W256移植瘤生长的影响
摘要：目的观察烧伤应激对大鼠W256移植瘤生长的影响。方法将36只皮下种植W256肿瘤细胞的Wistar大鼠随机分成对照组（A组）、轻度烧伤组（B组）、重度烧伤组（C组）3组（n=12）并予相应烧伤处理,10 d后处死大鼠并检测大鼠血清TNF-α、血管内皮生长因子（VEGF）,测量种植瘤的质量,免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果与A组比较,B、C组大鼠血清TNF-α、VEGF含量升高（P〈0.01）,肿瘤质量增大（P〈0.05）,肿瘤组织中VEGF、PCNA表达升高（P〈0.01）。结论烧伤应激促进大鼠W256移植瘤的生长。CRIPT与人甘丙肽2型受体的相互作用
摘要：目的通过寻找与人甘丙肽2型受体（hGalR2）C端相互作用的蛋白,以进一步探讨hGalR2转运和信号传导机制。方法利用酵母双杂交实验寻找可以与hGalR2 C端相互作用的蛋白,并通过酵母双转验证和免疫共沉淀实验验证受体和目标蛋白之间的相互作用。结果酵母双杂交方法结合免疫共沉淀实验发现和证实hGalR2与蛋白Cysteine-rich PDZ-binding protein（CRIPT）之间存在相互作用。结论 CRIPT可以与hGalR2结合而发生相互作用并可能因此参与hGalR2的转运或信号传导。大鼠窒息性心跳骤停全脑缺血模型制作的改进
摘要：目的对大鼠窒息性心跳骤停全脑缺血模型进行改进。方法 80只SD大鼠,随机分为2组：假手术（Sham）组和全脑缺血/再灌注（I/R）组。麻醉后行动静脉置管和气管插管,I/R组建立窒息性心跳骤停模型,待平均动脉压≤6 mmHg后4 min开始行心肺复苏,Sham组不窒息,不复苏。术后6、12、24、48和72 h行神经行为学评分,观察海马组织形态及神经元密度的改变。结果 I/R组术后24、48和72 h神经行为学评分较Sham组增高（P〈0.01）;同时相神经元密度较Sham组降低（P〈0.01）。结论全脑缺血/再灌注组神经行为学评分、组织学分级、神经元密度的改变均提示大鼠神经系统受到明显的损害,此造模方法是成功的,其损伤小,有效地提高了大鼠全脑缺血模型成功率。维药买朱尼对膝骨性关节炎患者血清及关节液中MMP-1、MMP-3及TIMP-1含量的影响
摘要：目的通过检测关节镜清理术后服用维药买朱尼.阿扎拉克与服用安慰剂膝骨性关节炎患者血清和关节液中基质金属蛋白酶1、3（MMP-1、MMP-3）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）表达水平的变化,分析维药买朱尼.阿扎拉克的作用机制和途径。方法 60例患者按单双号随机分成治疗组、对照组。治疗组患者关节镜清理术后1 d开始口服维药买朱尼.阿扎拉克,治疗30 d,2次/d,每次10 g;对照组患者口服安慰剂治疗。用ELISA法测定2组干预前后血清与关节液MMP-1、MMP-3与TIMP-1值。结果治疗组治疗后血清MMP-1、MMP-3含量均低于治疗前（P〈0.05）;关节液中的MMP-1含量低于治疗前,TIMP-1含量高于治疗前（P〈0.05）。对照组治疗后血清MMP-3含量低于治疗前（P〈0.05）。治疗组较对照组治疗后血清中MMP-3含量减少（P〈0.05）,血清与关节液中TIMP-1含量增加（P〈0.05）。结论维药买朱尼加关节镜治疗对比单纯性关节镜清理术可有效减少膝骨性关节炎患者血清MMP-3的生成,并增加患者血清与关节液中TIMP-1的生成。
