pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达
摘要：目的构建人钠碘转运体（hNIS）基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况。方法采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS。分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒（实验组）和pEGFP-C3（对照组）瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平。结果序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列（序列号：NM-000453）相似性达99.90%。转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组。结论成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达。雌激素对雌激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC的作用
摘要：目的探讨不同浓度17β-雌二醇（E2）对雌激素受体（ER）阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC体外生长的影响。方法选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC进行体外培养,加入含不同浓度E2的培养液,采用MTT比色、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞的增殖活性、细胞周期时相变化及Ca2＋的变化。结果不同浓度的E2作用JEC细胞1、2、3 d后,其OD值和对照组比较无统计学差异,作用4、5 d后10-7、10-8和10-9mol/L组OD值和对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,其中10-7mol/L组在第5天OD值与对照组比较有显著差异（P〈0.01）。10-7mol/L E2作用JEC细胞4、5 d后,G0/G1、S＋G2/M期细胞比例有所变化,但与对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。10-7mol/L的E2作用JEC 4 d后Ca2＋的平均荧光强度值高于对照组（P〈0.01）。结论 ER阴性的JEC细胞生长可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素对ER阴性JEC细胞生长的调控可能与细胞内Ca2＋增加有关。ATRA对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响
摘要：目的观察全反式维甲酸（ATRA）对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响,以探讨其抑癌机制。方法分别以终浓度为10-7、10-6、5×10-6、10-5mol/L的ATRA作用SW579细胞株,对照组加入5μl无水乙醇,各组细胞均在培养24 h后加药。继续培养48 h,RT-PCR、Western blot检测SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb mRNA及其蛋白的表达。结果 ATRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4、Rb mRNA表达水平没有明显变化;CyclinD1的表达明显下调;Western blot检测结果表明经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4蛋白表达水平没有明显变化,pRb蛋白的磷酸化水平明显下降,CyclinD1蛋白表达水平明显下降。结论 ATRA在一定浓度范围内可能通过下调甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CyclinD1的表达及Rb蛋白的磷酸化水平抑制细胞增殖。酒精性肝硬化患者血清甲状腺激素水平分析
摘要：目的探讨酒精性肝硬化患者血清甲状腺激素水平变化与临床特点。方法 87例肝硬化患者,其中酒精性肝硬化36例（酒精组）、乙肝肝硬化51例（乙肝组）,对照组为健康志愿者11例。根据肝功能对酒精性肝硬化患者进行Child-pugh分级。采用放射免疫法检测患者甲状腺激素血清浓度。结果肝硬化组血清TT3、FT3、TT4和FT4水平均低于对照组（P均〈0.01）,酒精组亦低于乙肝组（P均〈0.05）。酒精组随着肝功能分级升高,FT3和FT4逐渐降低。结论肝硬化患者存在明显的甲状腺激素水平异常,以酒精性肝硬化患者更为突出,甲状腺激素水平随肝功能损伤程度呈动态变化。脑血管病偏瘫患者252例康复治疗临床观察
摘要：脑血管病偏瘫患者的康复治疗是一门发展中的医学,现已有比较成熟的方法,治疗重点已从急性病痛逐步向各种功能障碍的康复转移。我们在常规的神经内科治疗同时加用了正规康复训练,且与中频治疗相结合,糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌组织中CNP和NPR-B蛋白含量变化
摘要：目的探讨糖尿病胃动力障碍大鼠胃窦平滑肌组织中C型钠尿肽（CNP）和B型钠尿肽受体（NPR-B）的蛋白含量变化。方法腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（65 mg/kg）4周,制备糖尿病动物模型。利用多道生理信号记录系统记录糖尿病大鼠胃窦平滑肌收缩活动,将发生胃窦平滑肌收缩活动紊乱的大鼠列入糖尿病胃动力障碍模型。采用免疫组织化学方法观察糖尿病大鼠胃窦平滑肌中CNP和NPR-B的分布。结果糖尿病胃动力障碍组大鼠与正常对照组相比胃窦平滑肌组织CNP表达无明显差异,但NPR-B表达明显增多（P〈0.01）。结论糖尿病大鼠发生胃动力障碍可能与胃窦平滑肌中NPR-B上调有关,提示糖尿病大鼠胃CNP-NPR-B/pGC-cGMP转导系统的改变可能参与胃动力障碍的发生。腹膜前间隙无张力疝修补术后补片排异反应1例
摘要：患者男,72岁,主因＂左腹股沟斜疝术后3个月,切口处胀痛10余d＂,于2011年3月4日入院。患者入院前3个月因患左腹股沟斜疝在我院行腹膜前间隙无张力修补术（应用艾瑞姆轻质聚丙烯腹膜前间隙修补疝补片,行腹膜前间隙及腹股沟管后壁双层修补,补片均用Prolene线缝合固定）,大鼠30%小体积肝移植模型两种切肝方法的比较
摘要：目的探讨建立理想的成功率较高的大鼠30%小体积肝移植模型的可靠方法。方法采用改良＂二袖套法＂非动脉化法建立大鼠30%小体积肝移植模型。实验组分为两组：A组,右叶＋三角叶＋尾状叶做供肝的30%小体积肝移植组,共40例;B组,中叶做供肝的30%小体积肝移植组,共40例。观察两组术后并发症和术后3 d生存率。结果 A、B组切肝时间分别为（11±3）、（14±3）min,P〈0.01;术后发生肝后下腔静脉狭窄分别有2例、8例,P〈0.05;术后3 d生存率分别为53%（21/40）、40%（16/40）,P〉0.05;断面出血、胆漏和感染的发生率两组无明显差异。结论通过技术改良,可以以右叶＋三角叶＋尾状叶为供肝建立稳定的大鼠30%小体积肝移植模型。以腰腿痛为表现的股骨缺血坏死临床分析
摘要：我院自2000年4月～2010年5月收治32例以腰腿痛为主要临床表现的患者,治疗效果欠佳,住院过程中发现患者合并有股骨头坏死,现报告如下。临床资料：本组男24例、女8例,年龄30～70岁、平均45.3岁,病史0.6～7 a;11例有腰部外伤史,4例有髋部外伤史,8例有长期饮酒史,3例有长期应用激素史,以Cathelicidin序列为模板设计合成抗菌肽的抗菌特性研究
摘要：目的研究以Cathelicidin序列为模板设计合成的抗菌肽对金黄色葡萄球菌的抗菌特性。方法根据NCCLS的方法,测定合成的抗菌肽对游离金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;配制5%的红细胞悬液,与抗菌肽混合孵育后测定540 nm的吸光度;金黄色葡萄球菌的过夜培养物加入80μg/ml的抗菌肽,37℃培养4 h,每隔1 h测定菌落数,比较在抗菌肽作用下活菌数随时间的变化。结果抗菌肽的MIC为16μg/ml,MBC为128μg/ml;100μg/ml抗菌肽的溶血性小于10%;抗菌肽作用4 h后,金黄色葡萄球菌活菌数（5.63±0.10）lg（cfu/ml）,与对照组相比有显著性差异（P〈0.05）。结论通过序列设计人工合成的抗菌肽对金黄色葡萄球菌有较强的活性,且溶血性较小。纤维支气管镜吸痰预防呼吸机相关性肺炎效果观察
摘要：呼吸机相关性肺炎（VAP）是指原无肺部感染的呼吸衰竭患者,在气管切开或气管插管行机械通气治疗48 h后或拔管48 h以内发生的肺部感染,随着呼吸机的广泛应用,VAP为最常见的并发症之一。采取切实有效的预防措施是预防VAP发病的关键,我院重症监护室（ICU）对机械通气患者试用纤维支气管镜吸痰,非那雄胺对TURP术中出血影响及其机制的Meta分析
摘要：目的探讨术前口服非那雄胺对经尿道前列腺电切术（TURP）术中出血的影响和相关机制。方法收集国内外已发表的有关术前口服非那雄胺对TURP术中出血影响及相关机制的随机对照研究（RCT）,利用RevMan软件进行固定效应模型和随机效应模型的Meta分析。结果共纳入13篇RCT研究,包括1 050例患者,其基线情况具有可比性。术前口服非那雄胺组和对照组相比,术中出血量、切除每克前列腺组织出血量、前列腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达水平和前列腺组织微血管密度（MVD）均显著降低（P均〈0.01）。结论术前口服非那雄胺能减少TURP术中出血,可能与降低前列腺组织中VEGF表达,减少前列腺组织MVD有关。红藻氨酸致癫痫大鼠血清和脑脊液中S100B、CRP的动态变化
摘要：目的观察致痫大鼠血清和脑脊液中S100B、C反应蛋白（CRP）含量的动态变化,以探讨这两种生化指标与癫痫的关系。方法雄性SD大鼠48只随机分为对照组（8只）和模型组（40只）,模型组再依据造模后大鼠处死时间分成6 h、12 h、24 h、72 h和1周共5组。采用红藻氨酸（KA）侧脑室注射建立癫痫动物模型,ELISA法测定大鼠造模后各时间点血清和脑脊液中S100B、CRP的含量,并与对照组比较。结果与对照组比较,模型组大鼠血清和脑脊液中S100B、CRP含量在癫痫发作后6 h逐渐增加,24 h达高峰,以后逐渐降低;血清和脑脊液中S100B、CRP水平均呈正相关（r=0.788和0.873,P均〈0.01）。结论致痫大鼠脑内存在动态的急性炎症反应,这种炎症反应可能参与癫痫发生及癫痫所致的脑损伤。血清和脑脊液中S100B、CRP可用于检测这种炎症反应和脑组织损伤。罗格列酮钠对中年男性糖尿病患者外周血内皮祖细胞的影响
摘要：目的观察罗格列酮钠对中年男性糖尿病患者血管内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。方法本实验纳入血糖控制良好（HbA1c〈7%）的30例中年男性糖尿病患者。体内实验：将上述患者随机分成罗格列酮钠组和常规治疗组。所有患者在用药前后均采集空腹静脉血,分离并培养EPCs,采用流式技术、免疫荧光双染法、MTT比色法、30 min贴壁方法、改良型Boyden小室法对EPCs进行计数、鉴定、增殖、黏附和迁移等功能检测。体外实验：随机抽取上述患者20例,提取其空腹静脉血单个核细胞,培养6 d后收集贴壁细胞,将收集到的每份贴壁细胞各分成药物干预组和对照组,用上述方法观察体外药物干预对EPCs数量和功能的影响。结果罗格列酮钠组用药后较用药前,CD3＋4/CD1＋33、vWF＋细胞数量增加,细胞增殖、黏附、迁移功能增强（P〈0.05或〈0.01）;较常规治疗组用药后,CD3＋4/CD1＋33、CD1＋33/KDR＋、vWF＋细胞数量增加,增殖、黏附、迁移功能增强（P〈0.01）。药物干预组EPCs增殖、黏附、迁移功能较对照组增强（P〈0.01）。结论罗格列酮能增加糖尿病患者EPCs数量,并能改善其增殖、黏附和迁移功能,且此作用独立于降糖、降压作用之外。应用环阵探头经直肠腔内超声检查诊断直肠肛管周围脓肿
摘要：应用环阵探头经直肠腔内超声检查直肠肛管周围脓肿,由于其扫查角度为360°,故可以取得较完整直肠肛管周围图像,有助于提高诊断的准确性。临床资料：收集我院普外科2010年10月～2011年4月初诊为直肠肛管周围脓肿患者37例,男21例、女16例,年龄32～59（41±2.4）岁。其中骨盆直肠间隙脓肿11例,Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
摘要：目的构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA（shRNA）真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础。方法设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析。化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞。将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒。脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础。参附注射液对人慢性髓性白血病细胞来源的树突状细胞诱导生成的影响
摘要：目的研究参附注射液（SFI）对慢性髓性白血病细胞系K-562细胞诱导生成树突状细胞（DCs）的影响。方法用不同浓度的SFI、粒—巨噬细胞集落因子（GM-CSF）/白细胞介素4（IL-4）及GM-CSF/IL-4联合不同浓度SFI 3种组合在体外诱导培养K-562细胞。结果体外单用SFI不能诱导K-562细胞分化为DCs。单用GM-CSF/IL-4可诱导K-562细胞分化为DCs,并具有DCs的特异性标志及功能,但不成熟。不同浓度的SFI联合GM-CSF/IL-4对K-562 DCs有促进成熟和抑制增殖的双向调节作用,其最佳诱导浓度为75 mg/ml。结论适当浓度的SFI联合GM-CSF/IL-4在体外能更有效地诱导K-562细胞分化为DCs,并促进DCs成熟,增强DCs功能,且75 mg/mlSFI与GM-CSF/IL-4联合有协同作用。不同压力控制性肺膨胀对内源性急性肺损伤疗效分析
摘要：目的探讨不同压力控制性肺膨胀（SI）对内源性急性肺损伤（ALI）的疗效。方法选用健康新西兰兔20只,随机分为5组,每组4只。C组：空白对照,仅行气管插管;P0、P1、P2、P3组：气管内注入生理盐水致ALI,并分别采用0、30、35、40 cmH2O压力进行肺复张。记录实验动物造模前、后和肺复张后30 min的气体交换、呼吸力学指标。结果对于肺内源性ALI家兔,SI压力为30 cmH2O时氧合并未有明显改善,仍低于300 mmHg,当压力为35cmH2O和40 cmH2O时氧合改善较好,且两者间差异无统计学意义。以35 cmH2O的压力实施SI时,家兔肺动态顺应性（Cdyn）增加;而压力提高至40 cmH2O时,Cdyn并不进一步增加。结论 35 cmH2O为实施SI治疗内源性急性ALI的适合压力。
