高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞增殖、胰岛素分泌水平及IRS-2表达的影响
摘要：目的探讨高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对胰岛B细胞增殖、胰岛素分泌功能的影响及机制。方法取对数生长期NOD鼠胰岛β细胞株NIT-1，以胰酶消化离心、收集细胞，按5×10^4个细胞／孔移至24孔培养板，继续培养48h后分别用葡萄糖浓度为5．6—27．6mmol／L的RPMI1640培养基处理，24h后随机分为对照组、罗格列酮1～3组，分别加入浓度为0～10^-5mol／L的罗格列酮培养；分别于干预24h和48h时收集细胞培养上清液，采用MTT法检测各组细胞增殖活性，放射免疫法检测胰岛素水平；Western blot技术检测胰岛素受体底物（IRS）-2蛋白表达水平。结果①四组细胞增殖活性及胰岛素分泌水平均随葡萄糖浓度升高而降低，其中罗格列酮1-3组细胞增殖活性和胰岛素分泌量均显著高于对照组（P〈0．05、0．01）。②罗格列酮3组在葡萄糖浓度为22．5、27．6mmol／L培养24h及葡萄糖浓度为11．1mmol/L培养48h时胰岛素分泌水平均显著高于对照组（P〈0．05、0．01）；不同浓度葡萄糖培养下罗格列酮3组细胞中IRS-2蛋白水平均显著高于对照组（P〈0．05、0．01），且变化趋势同上。结论在高浓度葡萄糖条件下罗格列酮可促进NIT-1细胞增殖、胰岛素分泌，机制可能与其上调IRS2表达有关。EV71 VP1黏膜疫苗制备及其诱导黏膜免疫的实验研究
摘要：摘要：目的研究表面展示肠道病毒71型（EV71）结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗，并分别通过灌胃＋滴鼻途径免疫BALB／c小鼠（观察组和对照组各16只），4周后摘眼球取血，脱臼处死小鼠收集肺泡及小肠冲洗液，采用ELISA方法检测血清、肺黏膜、肠黏膜中VP1特异性IgA抗体水平。结果枯草芽孢杆菌经培养及溶菌酶处理后均以芽孢形式存在；观察组血清及肺黏膜中VP1特异性IgA抗体水平均显著高于对照组（P均〈0．01），但两组肠黏膜中抗体水平无显著差异。结论展示EV71结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢可成功制备疫苗，且能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应；此为EV71疫苗的研制提供了新思路。成人骨髓源内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定
摘要：目的探讨成人骨髓源内皮祖细胞（EPCs）体外分离培养的可行性。方法抽取成年男性骨髓，体外全骨髓培养，传代后采用免疫微珠分选方法收集CD南细胞，EGM—MV2条件培养基诱导培养EPCs，观察细胞形态、生长情况；采用流式细胞技术检测分选细胞纯度，免疫荧光法检测EPCs特殊分子标志物CD34,CD133和VE-cadherin表达，透射电子显微镜观察分选细胞超微结构，UEA-1和Dil-ac-LDL双染色法检测分选细胞的吞噬功能。结果分选后细胞培养第3天出现集落样生长，集落边缘细胞形态伸展呈梭形或多边形，传代后呈现串珠样排列；培养至5～6d，细胞连接成大片条索状结构；CD34^＋、CD133^＋细胞百分率分别为24．13％、93．29％，其表面特异性表达CD133、CD34、VE-cadherin，具有EPCs形态特征，能吞噬Dil-ac-LDL并结合UEA-1。结论成人骨髓来源的EPCs经体外培养后形态、增殖率、生存能力、表面标志表达、功能等均较为稳定，可作为心血管组织工程种子细胞或用于干细胞治疗。流行性脑脊髓膜炎诱发空蝶鞍综合征1例
摘要：患者男，29岁。因“高热、剧烈头痛及间断性、喷射性呕吐2d”入院。入院查体：T39℃，血压19／12kPa，神志清楚，左口角有成簇新鲜疱疹，瞳孔等大、光反应略迟钝，视野无缺失，粗测视力稍差；眼底检查示视乳头边界欠清晰，中心凹浅，无水肿及渗血；心、肺、腹部检查无明显异常，四肢活动尚可，克氏征（＋），布氏征（＋），巴氏征（-）。RA患者血清VEGF水平变化及与腕关节滑膜血流参数的相关性研究
摘要：目的研究超声检测类风湿关节炎（RA）患者腕关节滑膜血流参数结合血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平检测判断疾病活动性的可行性。方法研究对象为62例治疗前RA患者（RA组）和30例健康志愿者（对照组），两组均采用ELISA法检测血清VEGF水平，RA组同时采用超声检查双侧腕关节滑膜血流分级、滑膜动脉阻力指数（RI）；采用Spearman法对滑膜血流分级、RI与血清VEGF水平的相关性进行分析。结果RA组血清VEGF水平明显高于对照组（P〈0．01）；RA组滑膜血流分级及R1分别与血清VEGF水平呈显著正相关和负相关，r=0．903、-0．817（P均〈0．01）。结论超声检测RA患者腕关节滑膜血流参数结合血清VEGF水平检测可反映疾病活动性，此对RA的临床诊治及疗效评估、预后判断具有重要指导意义。GL50分子在活化T细胞表面的表达及对细胞增殖的影响
摘要：目的探讨GL50分子在活化T细胞表面的表达及其生物学意义。方法分别取不同时相（24-144h）激发型CD3单抗联合CD28单抗活化的T细胞，采用流式细胞术分析T细胞表面GL50分子表达阳性率，RT-PCR法检测T细胞内GL50分子mRNA转录水平；^3H-TdR掺入法分析阻断GL50信号对T细胞增殖的影响。结果激发型CD3单抗联合CD28单抗活化T细胞后24h GL50分子阳性表达率为17．2％，其后逐渐升高至活化120h时达最大阳性率95．7％，并维持至活化144h时基本不变；T细胞活化24—144h均可检测到GL50分子mRNA表达；阻断性GL50分子单抗对活化T细胞增殖具有显著抑制作用。结论GL50分子在活化T细胞表面呈诱导性表达，且可与T细胞表面自身受体结合在免疫应答放大效应中发挥重要作用。Ezrin蛋白在结肠癌组织中的表达及意义
摘要：目的进一步探讨结肠癌的发生、发展机制。方法应用免疫组织化学染色法检测69份结肠癌组织及其对应癌旁良性组织、23份转移淋巴结组织中Ezrin蛋白、Ki-67蛋白表达，分析Ezrin蛋白表达与结肠癌临床病理特征及Ki-67蛋白表达的关系。结果Ezrin、Ki-67蛋白在结肠癌组织及转移淋巴结组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（P均〈0．01），Ezrin蛋白在结肠癌组织中的表达与组织分化程度及有无淋巴结转移、浆膜侵犯有关（P均〈0．01）；Ezrin蛋白与Ki-67蛋白表达呈显著正相关，P〈0．05（r=0．317）。结论Ezrin蛋白在结肠癌发生、发展中起重要作用；此为结肠癌的分子靶向治疗提供了依据。连续750例无吻合口漏食管、贲门癌手术临床分析
摘要：食管、贲门癌术后吻合口漏是一种常见且最严重的并发症，国内统计发生率在2％～5％。2006年8月。2010年9月，我们共为750例患者施行食管、贲门癌手术，结果无一例发生吻合口漏。现报告如下。海南红树林真菌WC1018的鉴定及免疫活性研究
摘要：目的对从海南省文昌市清澜港红树林土壤样品中分离到的菌株WC1018进行菌属鉴定和免疫活性测定。方法分离、提纯菌株WC1018，分别采用固体平板培养法、插片培养法观察其菌落形态和显微形态特征，并采用5．8SrDNA-ITS序列测定及其系统发育分析法进行分子生物学鉴定；利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测菌株的免疫活性。结果①WC1018的菌落形态和显微形态特征与曲霉属相似；系统发育树上与菌株WC1018同源性较高的序列均为曲霉属，其中与杂色曲霉菌株LTBF011-1的5．8SrDNA及ITS序列同源性最高，相似率及Bootstrap支持率均为100％。②WC1018发酵液处理后细胞增殖活性显著强于阴性对照。结论白海南省文昌市清澜港红树林土壤样品中分离到的菌株WC1018为具有显著免疫增强活性的杂色曲霉。部分常用词汇可直接用缩写
RNA干扰沉默Cyclin D1基因对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响
摘要：目的探讨以细胞周期蛋白（Cyclin）D1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响，为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10％FBS的DMEM培养液在37℃、5％CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞，至对数生长期后接种于96孔培养板中，随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组，并采用Lipo-fectamine^TM 2000脂质体分别转染Cyclin D1-小干扰RNA（siRNA）、阴性对照siRNA、脂质体，48h时收集细胞。应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平，MTT法检测细胞体外增殖活力，流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率（AI）。结果与空白对照组和阴性对照组相比，实验组Cyclin D1 mRNA和蛋白表达均明显下调，细胞生长速度明显减慢，G0／G1细胞比例显著增大、S期细胞比例则明显降低、AI显著升高（P均〈0．01）。结论Cyclin D1-siRNA能通过沉默靶基因表达抑制AsPC-1细胞生长、改变细胞周期分布、诱导细胞凋亡，可作为胰腺癌基因治疗的一个有效靶点。急性缺血性脑卒中进展与预后关系的前瞻性研究
摘要：目的探讨缺血性脑卒中进展情况及其与预后的关系。方法前瞻性连续登记569例急性缺血性脑卒中患者的临床资料，根据欧洲进展性卒中研究小组定义的进展性卒中诊断标准判定卒中有无进展，并进行定期随访；采用单因素和多因素Logistic回归分析研究卒中进展与预后的关系。结果127例（22．3％）患者诊断为进展性卒中，其3、6个月死亡、死亡／残疾发生率均显著高于非进展者（P〈0．05）；卒中进展是3、6个月死亡、死亡／残疾的独立危险因素。结论急性缺血性脑卒中患者中约有20％病情呈进展性，卒中进展是预后不良的独立危险因素。胃癌患者血清细胞因子水平变化及与肿瘤分化程度的关系
摘要：目的探讨胃癌患者机体细胞免疫状态变化，为肿瘤免疫治疗提供依据。方法研究对象为山东大学附属省立医院2001年5月-2009年1月住院手术的胃癌患者78例（胃癌组）及同期健康体检者80例（对照组），两组均抽取空腹外周静脉血3ml（胃癌组术前），分离血清，-20℃冻存。采用ELISA法检测血清细胞因子IL-2、IFN-γ,IL4、IL-6、IL-10、IL-12水平。结果与对照组比较，胃癌组血清IL-2、IFN-γ及IL-12均显著降低，IL-4、IL-6和IL-10均显著升高（P〈0．05、0．001）；胃癌分化程度越低IL-2、IFN-γIL-γ2降低幅度及IL-4、IL-6、IL-10升高幅度越明显。结论胃癌患者处于Th2型细胞占优势的Th1／Th2细胞漂移状态，并与肿瘤分化程度相关；纠正Th1／Th2细胞漂移、诱导Th0细胞向Th1细胞增殖分化，有望促进机体免疫功能恢复、激活抗肿瘤免疫应答，进而提高肿瘤综合治疗效果。冠状动脉严重狭窄SAP患者的侧支循环、EPCs、SDF-1α变化及意义
摘要：目的探讨冠状动脉严重狭窄稳定型心绞痛（SAP）患者循环内皮祖细胞（EPCs）及基质细胞衍生因子（SDF）-1α与冠状动脉侧支循环（CCC）形成的关系，为冠心病的治疗提供新思路。方法研究对象为同期收治的92例冠状动脉严重狭窄的SAP患者（CCC良好42例、不良50例），均采集外周血测定EPC数量、体外生成血管能力，并用ELISA法检测其血浆SDF-1α水平，采用直线相关和Pearson检验分析CCC良好与不良者各指标间及与CCC分级的相关性；同上分离92例患者外周血单个核细胞并随机分为6组，分别加入含有PBS、SDF-1α（10、50、100ng／ml）、SDF-1α（100ng／ml）＋CXCR4拮抗剂AMD3100、SDF-1α（100ng／ml）＋血管内皮生长因子（VEGF）特异性受体酪氨酸激酶抑制剂K18751的培养液，培养至第7天同上测定EPCs数量、体外生成血管能力，采用ELISA法检测培养液中VEGF水平。结果与CCC不良者比较，CCC良好者EPCs集落形成数量增加、体外生成血管能力增强，且血浆SDF-1α水平增加，三指标间及与CCC分级均呈显著正相关（P均〈0．01）；与PBS及SDF-1α＋AMD3100、SDF-1α＋K18751干预者比较，SDF-1α可呈剂量依赖性显著上调EPCs数量、增强其体外生成血管能力及VEGF水平（P〈0．05、0．01）。结论冠状动脉严重狭窄的SAP患者CCC形成情况与循环EPCs及血浆SDF-1α水平有关，VEGF可能参与此过程的调节；提高VEGF及SDF-1α活性可能对冠心病患者有益。LPSp对不同免疫方案中狂犬病毒抗原免疫效果影响的实验研究
摘要：目的研究革兰阴性非致病菌成团泛菌脂多糖（LPSp）作为狂犬病疫苗佐剂的免疫效果。方法将120只Balb／c小鼠随机分为空白组、LPSp对照组、铝佐剂疫苗组、狂犬病毒蛋白组、LPSp实验组各24只，其中后四组分别背部注射LPSp、铝佐剂疫苗、狂犬病毒蛋白及狂犬病毒蛋白＋LPSp进行1、2、4次免疫（各8只）；空白组注射等量生理盐水。另取8只小鼠为常规组，按铝佐剂疫苗组免疫4次，并于第28天行第5次免疫。各组均在初次免疫后第7、14、21、30、45、60天通过小鼠眼内眦静脉采血，分离血清，用ELISA法检测血清抗狂犬病毒IgG、IgM滴度。结果①免疫2、4次后LPSp实验组IgG抗体滴度均显著高于狂犬病毒蛋白组和铝佐剂疫苗组（P〈0．05），且4次免疫后抗体滴度在第60天仍呈上升趋势，而铝佐剂疫苗组IgG抗体滴度在45d已达高峰，其后逐渐下降；各组免疫1、2次者免疫效果均欠佳，免疫2次后LPSp实验组IgG抗体滴度达高峰时间显著早于狂犬病毒蛋白组和铝佐剂疫苗组（P〈0．05）。②LPSp实验组免疫4次者各时间点IgG抗体滴度均显著高于常规组，且可维持更长时间（P〈0．05）；LPSp实验组免疫2次者IgG抗体滴度与铝佐剂疫苗组免疫4次者效果相当。③LPSp实验组免疫1次后第7天IgM抗体滴度显著高于狂犬病毒蛋白组与铝佐剂疫苗组（P〈0．05），第7天后IgM抗体滴度下降，但再次免疫时又出现以上趋势。结论LPSp作为狂犬病毒蛋白疫苗的佐剂可显著提高小鼠产生抗狂犬病毒IgG、IgM抗体的滴度，且可延长抗体的维持时间、减少接种次数，其效果优于铝佐剂。单鼻孔经蝶入路切除垂体腺瘤术后并发症的发生原因及与预防措施
摘要：垂体瘤是颅内常见的肿瘤，可引起多种内分泌症状及多脏器、器官损害。2010年5月-2011年4月，我们共对39例垂体腺瘤患者行单鼻孔经蝶入路手术，其中19例术后出现不同类型并发症。现分析并发症发生原因并提出预防对策。VEGF与TGF-β1在胶原诱导的RA大鼠滑膜组织中的表达及意义
摘要：目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子（TGF）-β1在类风湿关节炎（RA）发病中的作用，为RA的靶点治疗提供依据。方法采用皮下多点注射牛Ⅱ型胶原方法对18只Wistar大鼠建立RA模型（实验组），同时选择10只Wistar大鼠皮下注射等量生理盐水作对照组，实验28d处死大鼠、收集滑膜组织，用免疫组化法检测两组VEGF蛋白与TGF-β1蛋白表达，RT—PCR技术检测VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA水平。结果VEGF蛋白及TGF-β1蛋白阳性染色均主要位于滑膜衬里层和滑膜下层的滑膜细胞及血管内皮细胞，实验组滑膜VEGF、TGF-β1蛋白及mRNA表达均显著高于对照组（P均〈0．01）；VEGF mRNA与TGF-β1 mRNA表达呈正相关，r=0．481（P〈0．05）。结论VEGF和TGF-β1在RA滑膜增生、浸润及关节破坏中起协同作用，以两者为靶点的药物有望为RA治疗提供新思路。大鼠胰腺原位灌注实验模型的建立及可行性研究
摘要：目的建立大鼠胰腺原位灌注实验模型，并对其用于胰岛B细胞功能研究的可行性进行验证。方法将10只健康SD大鼠随机分为观察组和对照组各5只，均用戊巴比妥钠行腹腔注射麻醉，按文献将胰腺与脾、胃和结肠等组织器官分离后建立原位灌注实验模型，观察组分别以低糖灌注液灌注10min、依拉地平-高糖灌注液灌注25min，对照组分别以低糖灌注液灌注10min、高糖灌注液灌注25min；用4℃预冷并加有20μl抑肽酶的eppendorf管收集两组门静脉插管的流出液，用放射免疫分析法检测胰岛素水平，计算胰岛素分泌率、基础胰岛素分泌率、葡萄糖刺激的胰岛素分泌率。结果①两组基础胰岛素分泌率无显著差异，均呈现低水平状态。②对照组在第1时相胰岛素分泌水平迅速升高，分泌高峰出现在第12分钟，随后迅速下降，并在一个较高水平稳定波动（即第2时相）；观察组胰岛素分泌峰值及胰岛素第1、2时相分泌率均显著低于对照组（P均〈0．01）。结论胰腺原位灌注模型较体外灌注模型更易于操作，且同样具备可定量、可重复、可动态观察等优点；此为胰岛β细胞功能的研究提供了一种有效实用的方法。
