GFP示踪FLAG抗原表位标记BMP2转基因腺病毒穿梭质粒的构建
摘要：目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP2）目的蛋白和示踪绿色荧光蛋白（GFP）报告分子的腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1。方法采用PCR技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因诱变,去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ。测序检测诱变情况,将诱变后的BMP2基因定向导入pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1,将质粒分别转染人胚肾细胞HEK293A和兔骨髓间充质干细胞（MSCs）。通过限制性内切酶酶切图谱分析该质粒;采用荧光显微镜检查和免疫组化SP法测定HEK293A中的GFP和MSCs中的BMP2,行重组腺病毒穿梭质粒鉴定。结果质粒pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1经双酶切鉴定图谱分析构建正确,HEK293A、MSCs中均有GFP和BMP2表达。结论 pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1构建成功。VEGF121和BMP2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及其在HEK293中的表达
摘要：目的构建人血管内皮生长因子121（VEGF121）与人骨形态发生蛋白2（BMP2）双基因共表达腺病毒载体Adv-BMP2-IRES-VEGF121,并观察其在人胚肾细胞株（HEK293）中的表达情况。方法对腺病毒质粒pShuttle-CMV-BMP2的目的基因BMP2进行PCR扩增。腺病毒质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经Kpn I/Xba I酶切后,将BMP2片段定向导入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,构建pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,并注入大肠杆菌DH5a中扩增,提取质粒。通过酶切分析、PCR检测和序列分析进行鉴定。将构建所得的质粒转染HEK293,采用RT-PCR法检测HEK293中的BMP2、VEGF121 mRNA,Western blot法检测其蛋白。结果成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121。酶切分析及DNA序列测定证实重组质粒构建正确。质粒转染后的HEK293 BMP2和VEGF121表达阳性。结论成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121,其转染HEK293后,VEGF121、BMP2在HEK293中共表达阳性。个体化护理干预对肠造口患者术前心理状态的影响
摘要：肠造口患者不仅要承受疾病的痛苦,且还要忍受排便改道、粪便无法自主控制所带来的不便,易出现心理障碍,其中焦虑是最常见的应激反应之一。2007年1月～2009年1月,我们对行肠造口术的54例患者予以个体化护理干预,消除患者负性情绪,效果满意。现报告如下。骨肉瘤组织中COX-2、VEGF的表达及意义
摘要：目的观察骨肉瘤组织中环氧化酶2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并探讨其意义。方法对骨肉瘤患者45例行截肢术或瘤段切除假体置换术。术中分别切取骨肉瘤组织及对应癌旁（肿瘤组织边缘外5.0 cm处）组织标本。采用免疫组化SP法检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中的COX-2、VEGF;以CD34为标记,计算微血管密度（MVD）。结果 COX-2和VEGF阳性表达率及MVD在骨肉瘤组织中分别为80.0%、75.6%和（43.6±11.4）条/HP,均高于癌旁组织的22.2%、17.8%和（13.5±7.3）条/HP,且三者与骨肉瘤的外科分期有关（P均〈0.05）。COX-2与VEGF的表达呈正相关,COX-2和VEGF的表达均与MVD呈正相关（r分别为0.75、0.58和0.75,P均〈0.05）。COX-2和VEGF同时阳性表达时,MVD显著增高（P〈0.05）。结论 COX-2和VEGF在骨肉瘤组织中呈高表达,且与骨肉瘤外科分期呈正相关。二者共同参与了骨肉瘤的发生、发展,其机制可能是促进骨肉瘤组织中血管生成。食管癌根治术后严重并发症患者的护理
摘要：2008年1月～2010年5月,我院ICU共收治食管癌根治术后严重并发症患者21例,现将护理方法介绍如下。临床资料：本组21例中,男15例,女6例,年龄42～80岁。均行食管癌根治术。术后发生吻合口瘘3例,急性呼吸衰竭5例,消化道应激性溃疡7例,肺栓塞1例,桡骨远端锁定钛板内固定治疗锁骨近端粉碎性移位骨折（附13例报告）
摘要：目的观察桡骨远端锁定钛板内固定治疗锁骨近端粉碎性移位骨折的疗效。方法对13例锁骨近端粉碎性移位骨折患者采用切开复位桡骨远端锁定钛板内固定治疗,合并胸锁关节脱位2例同时行关节复位、关节囊修复术。记录患者手术时间及出血量、伤口愈合及骨折愈合情况。采用Rockwood肩关节功能评分进行疗效评定。结果本组手术时间为30～120 min,术中出血量为50～200 ml。术后随访5～15个月,X线检查示骨折复位良好,内固定可靠。随访期内骨折均愈合,未出现钛板断裂、螺钉拔出、皮肤坏死感染、骨折延迟愈合或畸形愈合等并发症。术后肩关节活动时胸锁关节处隐痛3例;合并胸锁关节脱位2例中,稍有前凸畸形1例,肩关节活动时胸锁关节处隐痛1例。Rockwood肩关节功能评分优9例,良3例,可1例,优良率92.3%。讨论桡骨远端锁定钛板内固定治疗锁骨近端粉碎性移位骨折疗效较好。腹部外敷四黄散治疗术后早期炎性肠梗阻12例效果观察
摘要：术后早期炎性肠梗阻是腹部手术后早期并发症,其首选的治疗方法是保守治疗。2009年6月～2010年12月,我们采用腹部外敷四黄散治疗术后早期炎性肠梗阻12例,疗效较好。现报告如下。PVP治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折对患椎邻近椎体退变和骨折发生率的影响
摘要：目的分析经皮椎体成形术（PVP）治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折对患椎邻近椎体退变及骨折发生率的影响。方法骨质疏9松性椎体压缩骨折患者51例,随机分为手术组30例和对照组21例,分别采用PVP治疗和保守治疗。通过X线片测算两组治疗前及治疗后1 a患椎上下椎体前缘压缩率、中柱压缩率、后倾角（θ角）。观察治疗后1 a两组患椎邻近椎体的退变情况及骨折发生率。结果手术组术后1 a患椎上下椎体前缘压缩率、中柱压缩率及θ角均较对照组增大（P均〈0.01）。手术组术后1 a发生患椎邻近椎体骨折5例（16.7%）,对照组无邻近椎体骨折发生（P〈0.05）。结论 PVP治疗骨质疏松椎体压缩性骨折可加速患椎邻近椎体退变,并增加邻近椎体骨折的风险。Schwann细胞对大鼠坐骨神经缺损后脊髓前角运动神经元保护作用观察
摘要：目的观察Schwann细胞（SC）脊髓内移植对大鼠坐骨神经缺损后脊髓前角运动神经元的保护作用并探讨机制。方法取2 d龄SD大鼠坐骨神经培养、纯化、传代SC,并行纯度鉴定。另取48只SD大鼠制作坐骨神经缺损模型,随机均分为实验组和对照组。实验组大鼠于脊髓腹角注射SC;对照组给予等量生理盐水。两组分别于术后1、4、8周各取8只大鼠,取L4～6段脊髓,观察运动神经元数目并计算存活百分率,电子显微镜下观察神经元的超微结构。结果 SC经培养纯化后纯度为95.6%±2.5%。实验组伤侧神经元数目较对照组明显增加,运动神经元存活率为87.2%±4.6%,高于对照组的58.4%±5.4%（P〈0.01）。实验组神经元细胞器及大部分神经纤维的髓鞘结构较对照组清晰完整。结论 SC对大鼠坐骨神经缺损后的脊髓前角运动神经元具有保护作用,其机制可能是促进脊髓运动神经元的存活和再生。人胆固醇酯水解酶重组腺病毒载体的构建
摘要：目的构建人胆固醇酯水解酶（hCEH）基因重组腺病毒载体,并在人胚肾细胞（HEK293）中扩增。方法将hCEH基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hCEH,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组质粒pAd-hCEH,酶切后用脂质体转染HEK293,包装成重组体腺病毒Ad-hCEH,经扩增和纯化得到高滴度重组病毒。采用PCR法进行鉴定,绿色荧光蛋白（GFP）追踪,荧光显微镜下观察并计算Ad-hCEH病毒滴度。结果重组穿梭质粒及其载体经鉴定后,电泳结果与预期相符。Ad-hCEH-EGFP感染HEK293后,随时间增加,HEK293表达绿色荧光的量也增加。hCEH碱基序列经测序与Genebank中已知序列完全吻合。Ad-hCEH电泳结果显示1 700 bp附近有一条带,与目的片段相符合。最终测得Ad-hCEH滴度为1.2×1010 pfu/ml。结论成功构建了携带hCEH基因的重组腺病毒载体。VEGF单克隆抗体对人舌癌细胞Tca-8113增殖抑制作用观察
摘要：目的观察VEGF单克隆抗体对体外舌癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法对数生长期的Tca-8113细胞制成2.5×107/ml的单细胞悬液,接种于96孔板。设A、B两组。培养6 h待细胞贴壁后,A组加入VEGF单克隆抗体,B组不添加任何药物。分别于培养后24、48、72、96 h检测细胞生长存活率,于培养后48 h采用流式细胞仪检测细胞周期,Real-time PCR法检测两组细胞中的VEGF mRNA。结果培养24、48、72、96 h后,A组细胞生长存活率分别为65.9%、46.1%、69.7%、30.3%（P均〈0.05）。A组G2/M期细胞数量较对照组明显增多（分别为7.393%±0.323%和2.733%±0.055%,P〈0.01）,A组VEGF mRNA表达水平显著低于B组（分别为0.180±0.061和1.000±0.000,P〈0.01）。结论 VEGF单克隆抗体可抑制Tca-8113细胞增殖,可能是通过诱导Tca-8113细胞凋亡和细胞周期重分布及下调细胞中VEGF mRNA的表达而发挥作用。CD147基因沉默对甲状腺乳头状癌细胞中VEGF-C表达的影响
摘要：目的观察CD147基因沉默对甲状腺乳头状癌细胞株K1中血管内皮生长因子C（VEGF-C）表达的影响,筛选有效的小干扰RNA（siRNA）序列。方法设计合成3对不同的CD147 siRNA,分别转染人K1为实验组（S1、S2、S3组）,同时设不加干预者为正常组,siRNA阴性对照进行干预为阴性对照组。RT-PCR、ELISA法分别测定各组CD147 mRNA及其蛋白。筛选能有效沉默CD147 mRNA及其蛋白的siRNA序列。RT-PCR、Western blot法分别测定CD147表达沉默后K1细胞中的VEGF-C mRNA及其蛋白。结果 S1组CD147 mRNA及其蛋白表达量与正常组、阴性对照组相比,P均〉0.05。S2、S3组与正常组、阴性对照组相比,P均〈0.05。S2、S3组的siRNA序列可有效沉默CD147的表达而S1组不能。S2、S3组CD147 mRNA的表达抑制率分别为67.8%和72.5%;CD147蛋白表达抑制率为31.7%和35.4%。S2、S3组K1细胞中VEGF-C mRNA表达抑制率分别为66.4%和56.6%;其蛋白表达抑制率分别为51.9%和41.6%。结论筛选出了能有效沉默CD147基因表达的siRNA序列。CD147基因沉默后可降低K1细胞中VEGF-C的表达,可能影响肿瘤细胞的淋巴结转移能力。hPRA、hPRB真核表达载体及其转基因人子宫内膜癌细胞系的构建
摘要：目的构建人孕激素受体（hPR）亚型hPRA、hPRB真核表达载体,并以此建立表达不同hPR亚型的人子宫内膜癌细胞系。方法构建真核表达载体pcDNA3.1-hPRA、pcDNA3.1-hPRB,采用脂质体介导法转染hPR阴性的人子宫内膜癌细胞系HECCA,将HECCA分3组,前2组分别转染pcDNA3.1-hPRA、pcDNA 3.1-hPRB,同时转染两种质粒。Western blot技术检测转染细胞中hPRA、hPRB的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pcD-NA3.1-hPRA、pcDNA3.1-hPRB构建正确。pcDNA3.1-hPRA、pcDNA3.1-hPRB成功转染HECCA后,在HECCA中检测出了hPRA、hPRB表达,建立了3株转染细胞：HECCA-A只表达hPRA,HECCA-B只表达hPRB,hECCA-AB表达hPRA及hPRB。结论成功构建了hPRA、hPRB真核表达载体,载体转染后的HECCA能分别稳定表达hPRA、hPRB,建立了表达不同hPR亚型的人子宫内膜癌细胞系。本刊再次入选《中文核心期刊要目总览》
摘要：2009年1月初,我刊收到《中文核心期刊要目总览》2008年版编委会通知：《山东医药》入选《中文核心期刊要目总览》2008年版综合性医药卫生类核心期刊。大鼠脊髓损伤模型脊髓组织中Mst3b、GAP-43的表达及意义
摘要：目的观察大鼠损伤脊髓组织中哺乳动物ste20样蛋白激酶3b（Mst3b）、神经生长相关蛋白43（GAP-43）的表达变化,探讨其意义。方法 68只SD大鼠,取4只作正常对照（A组）,余随机均分为假手术（B）组、单纯损伤（C）组、肌苷治疗（D）组和6-硫代鸟嘌呤（6-TG,E）组。C、D、E组建立大鼠脊髓半横断损伤模型,B组只咬除棘突及椎板不损伤脊髓。各组分别于术后3、7、14、28 d采用免疫组化SP法检测脊髓中的Mst3b和GAP43蛋白。采用BBB运动功能评分法评定术后各时点C、D、E组动物左右肢功能。结果 A组大鼠脊髓组织中Mst3b、GAP-43无表达,B组极少表达,C、D、E组有明显表达（P均〈0.01）;Mst3b、GAP-43分别在术后7、14 d表达率最高,与大鼠左右肢功能的恢复趋势一致（P均〈0.01）;Mst3b与GAP-43的表达呈正相关（r=0.804,P〈0.01）。大鼠左右肢BBB评分D组高于C组,C组高于E组（P均〈0.01）。结论 Mst3b、GAP-43在大鼠正常脊髓组织中无表达,在损伤脊髓组织中表达明显,且二者表达呈正相关关系。Mst3b、GAP-43可能在脊髓损伤修复过程中起重要作用。膝关节假体感染兔血浆PCT水平变化及意义
摘要：目的观察膝关节假体感染兔血浆降钙素原（PCT）水平变化,并探讨其意义。方法取40只新西兰大白兔,建立兔膝关节置换模型;造模后随机分为感染组和对照组各20只。于关节置换术后第15天分别向感染组和对照组兔右后膝关节腔内注入金黄色葡萄球菌（金葡菌）ATCC25923菌液、生理盐水各1 ml。采用酶联免疫吸附法检测造模前24 h、造模后24 h、接种后24 h兔血浆PCT。结果造模前24 h兔血浆PCT为（144.75±73.03）ng/ml,造模后24 h为（149.91±79.08）ng/ml;造模前后比较,P〉0.05;接种后24 h感染组血浆PCT为（844.63±619.53）ng/ml,对照组为（141.10±82.25）ng/ml,两组比较,P〈0.05;接种后24 h感染组血浆PCT与造模前、后24h比较,P均〈0.05。结论膝关节假体感染兔血浆PCT水平升高,可作为假体感染的辅助诊断指标之一。PICC化疗血液病患者导管堵塞原因分析及护理
摘要：2002年9月～2010年9月,我们采用经外周静脉穿刺置入中心静脉导管（PICC）化疗治疗血液病320例,其中83例发生导管阻塞。现分析导管堵塞的原因,并探讨其护理方法。持续性牵张损伤对兔后肢运动功能及脊髓组织中SOD活性、MDA含量的影响
摘要：目的建立兔脊髓持续性牵张损伤模型,观察持续性牵张损伤对兔后肢运动功能及脊髓组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响,并探讨其意义。方法 60只健康大白兔随机均分为对照组（A组）、B、C、D组和假手术组（E组）。A组不进行手术。B、C、D组分别牵张L1/L2小关节突25%、50%、100%距离,维持撑开程度,安装内固定。E组术中仅安装内固定,不进行撑开。测定各组术前及术后8 h、1、7、14 d时Tarlov评分和Molt斜板临界角,脊髓组织内SOD活性和MDA含量,并进行组织形态学观察。结果 B、C、D、E组Tarlov评分和Molt斜板临界角依次降低,B、C、D组SOD活性依次降低,MDA含量依次增加（P均〈0.05）;术后3 d SOD活性和术后7 d MDA含量分别与牵张距离呈负、正相关（r=-0.99、0.96,P均〈0.05）;随着牵张距离增加,脊髓组织病理改变逐渐加重。结论成功建立兔脊髓持续性牵张损伤模型。随牵张距离增大,兔脊髓后肢功能受损加重,脊髓组织内SOD活性降低、MAD含量升高,脊髓缺血缺氧改变早于运动功能损伤。
