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摘要:目的 筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法 用密度梯度离心方法 分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Trizol提取mRNA,逆转录获得cDNA,然后用6个常用的内参基因ACTB、B2M、DDX5、GAPDH、YWHAZ和18sRNA的特异性引物进行实时定量PCR检测,结果 用geNorm、NormFinder和Bestkeeper软件进行数据分析。结果 18sRNA基因丰度太高,在PBMCs表达不稳定,DDX5、YWHAZ和B2M的稳定最好,适合作为活动性肺结核患者PBMCs的内参基因,而ACTB和GAPDH稳定性略低。结论 筛选出稳定的内参基因DDX5、YWHAZ和B2M,可用于活动性肺结核患者PBMCs基因表达分析。
摘要:目的 评估结核耐药基因rpoB/katG/inhA筛查耐多药结核的可行性及临床意义。方法 对2016年1月至2017年5月我科住院的228例肺结核患者分别采用结核耐药基因检测法和改良罗氏培养比例法检测利福平、异烟肼是否耐药,比较两种检验方法 诊断的一致性。结果 以改良罗氏培养比例法为金标准,228例患者中结核耐药基因检测法利福平耐药的灵敏度为88.24%,特异度为97.63%,异烟肼耐药的灵敏度为92.31%,特异度为99.01%。两法有较高的一致性(无统计学差异)。结论 结核耐药基因rpoB/katG/inhA可早期、快速、准确检测利福平、异烟肼的耐药性,可作为耐多药结核早期筛查的方法 ,对结核病防与治有重要意义。
摘要:目的 探讨高频电凝联合冷冻消融治疗肉芽增殖型支气管结核的有效性及安全性。方法 选取2012年5月-2016年9月首都医科大学附属北京胸科医院收治的146例肉芽增殖型气管支气管结核患者,所有患者支气管镜下所见肉芽肿均超过正常支气管管径的1/2,均为初治患者。其中49例采用冷冻消融治疗,48例采用高频电凝治疗,49例采用高频电凝联合冷冻消融治疗。所有患者均接受全身“2HRZE/10HRE”抗结核治疗及“H”雾化吸入治疗,介入治疗结束后镜下局部注药“HR”治疗。观察三组患者治疗次数、近远期疗效评估、并发症等情况。结果 高频电凝联合冷冻消融组共治疗(1.40±0.59)次,少于冷冻消融组的(6.58±1.72)次(P〈0.0167),但与高频电凝组的(1.55±0.59)次之间无显著统计学差异。治疗结束时高频电凝联合冷冻消融组总有效率为97.96%(48/49),高于冷冻消融组的总有效率81.63%(40/49),但与高频电凝组间无显著统计学差异(97.96% vs 95.83%)。治疗结束1个月及6个月后复查,高频电凝联合冷冻消融组总有效率均高于高频电凝组,但与冷冻消融组无显著统计学差异。并发症方面,治疗结束时、治疗结束后1个月及治疗结束后6个月高频电凝组肉芽肿再生率均高于冷冻消融组及高频电凝联合冷冻消融组,而冷冻消融组及高频电凝联合冷冻消融组间无统计学差异。高频电凝组1例患者出现气道管壁软化。三组均未见其他严重并发症。结论 针对肉芽肿超过正常管径1/2的肉芽增殖型支气管结核,高频电凝联合冷冻消融治疗具有较好的有效性和安全性。
摘要:目的 了解亳州地区涂阳肺结核患者的耐药情况,为结核病疫情控制提供参考依据。方法 将调查期连续纳入的涂阳肺结核病例的痰液标本在体外培养,用比例法进行药物敏感试验,分析异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KAM)的药敏试验结果 。结果 共收集266例痰培养阳性标本,其中251例为结核分枝杆菌(MTB),占94.36%,15例为非结核分枝杆菌(NTM),占5.64%。药敏结果 显示6种药物的总耐药率29.08%,耐药率最高的为RFP(16.33%);初治耐药率25.94%,耐药率最高的为SM(15.09%),复治耐药率46.15%,耐药率最高的为RFP(43.59%)。检出耐多药菌株(MDR-TB)31例(12.35%),广泛耐药菌株(XDR-TB)3例(1.20%)。复治患者对一线,二线药物耐药率均大于初治患者,复治MDR患者耐药率明显大于初治患者,复治患者对INH、RFP、OFX的耐药率均大于初治患者。结论 亳州市结核病患者的耐药情况不容乐观,特别是复治患者的耐多药情况较为严重。
摘要:目的 探讨不同抗结核治疗用于老年肺癌伴肺结核的临床意义。方法 将我院82例老年肺癌伴肺结核患者按随机数表法均分为观察组(新抗结核治疗方案:力克肺疾、利福喷丁、莫西沙星)与对照组(标准抗结核方案:异烟肼、利福平、吡嗉酰胺、乙胺丁醇),两组抗结核治疗时间均为2个月,肺癌治疗采取局部楔形切除术或局部楔形切除术+化疗。对比两组痰菌转阴率、肺部病灶吸收情况及生化检验结果 [血沉(ESR)异常、C-反应蛋白(CRP)异常],记录肺癌生活质量评估量表(FACT-L)评分及副作用发生率。结果 两组痰菌转阴率比较无显著差异(P〉0.05)。观察组胸部影像吸收率90.24%明显高于对照组72.17%,胸部影像进展率4.88%明显低于对照组19.51%(P〈0.05)。两组治疗后生理状况(10.06±3.25)分、社会/家庭状况(11.57±3.08)分、情感状况(10.95±3.35)分、功能状况评分(12.47±2.87)分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P〈0.05)。两组治疗前后肺癌相关症状评分比较无显著差异(P〉0.05)。观察组副作用发生率34.15%低于对照组56.10%(P〈0.05)。结论 新抗结核方案治疗老年肺癌伴肺结核在痰菌转阴率、生化检验结果 方面无显著差异,但前者肺部影像检查及生命质量有明显改善,且副作用更少,临床应用价值更高。
摘要:目的 探究NRAMP1 rs17235409和rs3731865单核苷酸多态性与结核病发生的关系。方法 应用聚合酶链反应检测NRAMP1 rs17235409和rs3731865基因多态性,比较结核病患者组与健康人群NRAMP1 rs17235409和rs3731865基因型的分布频率差异以及等位基因频率差异。结果 50例结核病患者组和50例健康人群对照组NRAMP1 rs17235409基因型分布频率野生型GG为52%/68%,杂合型GA为28%/24%,突变型AA为20%/8%,两组比较χ2=7.06,P=0.029,等位基因频率野生型G为66%/80%,突变型A为34%/20%,两组比较χ2=5.36,P=0.024;NRAMP1 rs3731865基因型分布频率野生型GG为48%/60%,杂合型GC为26%/22%,突变型CC为26%/18%,两组比较χ2=8.01=0.021,等位基因频率野生型G为61%/71%,突变型C为39%/29%,两组比较χ2=6.24,P=0.017。结论 结核病患者组与健康人群对照组NRAMP1 rs17235409和rs3731865基因型分布频率和等位基因频率的差异有统计学意义,提示结核病的发生可能与NRAMP1 rs17235409和rs3731865基因型多态性具有某种关联。
摘要:目的 探讨胸腔积液患者结核分枝杆菌/利福平耐药基因检测(Xpert MTB/RIF)、胸腔积液腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)/血清ADA检测和外周血结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合检测在诊断结核性胸膜炎中的应用价值。方法 以2017年1-12月在我院就诊的120例结核性胸膜炎患者为研究对象,设为观察组,同时纳入同期在我院就诊的120例非结核性胸膜炎胸腔积液患者,设为对照组。分别进行胸腔积液Xpert MTB/RIF检测、胸腔积液ADA/血清ADA检测、外周血T-SPOT.TB检测和联合检测,分别比较单项检测、两两联合检测和三项联合检测的应用价值。结果 观察组胸腔积液XpertMTB/RIF、胸腔积液ADA/血清ADA检测、外周血T-SPOT.TB、两两联合和三项联合检测的阳性率分别为58.33%、75.83%、78.33%、80.00%、83.33%、81.67%、92.50%;三项联合检测的灵敏度显著高于单项检测和两两联合检测,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 胸腔积液Xpert MTB/RIF、胸腔积液ADA/血清ADA检测以及外周血T-SPOT.TB三项联合检测能显著提高灵敏度,并伴有较高的阴性预测值和诊断准确率,可防止漏诊,对结核性胸膜炎有重要的辅助诊断价值。
摘要:目的 探讨经急诊住院的初治肺结核患者的死亡原因,旨在减少初治肺结核患者死亡率。方法 回顾性分析2015年1月-2017年12月经我院急诊收治的初治肺结核患者1634例,死亡67例,作为研究组,随机选取未死亡患者65例作为对照组,比较两组的各项临床观察指标,行单因素分析;对有显著性差异的指标进行多因素分析,以发现初治肺结核患者死亡原因。单因素分析采用χ~2检验,多因素分析采用Logistic回归分析。结果 1634例急诊收治的初治肺结核患者,住院28天死亡67例(4.10%),两组比较进行单因素分析发现:高龄、痰菌阳性、血白细胞升高、合并下呼吸道感染、贫血、低蛋白血症、合并糖尿病、呼吸功能衰竭、冠心病、脑血管病以及延迟就医(发病到医院就诊时间大于4周)是初治肺结核患者死亡的原因。对这些因素进一步行多因素分析显示,低蛋白血症是初治肺结核患者死亡的危险因素。结论 本研究发现低蛋白血症是初治肺结核患者死亡的危险因素。
摘要:目的 探讨老年非小细胞肺癌患者和肠道产丁酸菌的相关性。方法 随机选择2015年2月-2017年8月确诊的40例老年非小细胞肺癌患者,从本院健康体检人群中随机选择体检健康老年人40例作为对照组,对比老年肺癌组和对照组肠道产丁酸菌表达水平。对老年非小细胞肺癌患者给予培美曲塞+顺铂方案进行化疗,对比化疗前后肠道产丁酸菌表达水平变化。结果 老年非小细胞肺癌组的肠道产丁酸菌普拉梭菌、柔嫩梭菌、梭菌组1、直肠真杆菌、Atopobium cluster-specific primes、Roseburia spp.and E.rectale、Cluster Ⅳ Ruminococcus spp、Clostridial cluster ⅩⅣa表达显著低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);肺癌组化疗后的肠道产丁酸菌普拉梭菌、柔嫩梭菌、梭菌组1、直肠真杆菌、Atopobium cluster-specific primes、Roseburia spp.and E.rectale、ClusterⅣRuminococcus spp、Clostridial cluster ⅩⅣa表达显著低于化疗,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 老年非小细胞肺癌患者体内肠道产丁酸菌产生减少,化疗后肠道产丁酸菌产生显著低于化疗前,肠道微生态化失调可能与非小细胞肺癌患者易发感染有关。
摘要:目的 探讨PDTC (Pyrrolidine dithiocarbamate)对顺铂耐药的作用及机制。方法 收集对数生长期的A549细胞,分为四组:对照组、PDTC组、DDP组、PDTC+DDP组。应用MTT法检测细胞的增殖抑制率,实时荧光定量PCR方法 检测NF-KB mRNA的表达水平,Western blot检测各组NF-KB p65的含量。结果 培养48h和72h,DDP组与PDTC+DDP组细胞增殖抑制率明显高于对照组(P〈0.05),并且PDTC+DDP组细胞增殖抑制率明显高于DDP组(P〈0.05);PDTC组NF-κB mRNA的表达及蛋白表达量明显低于对照组(P〈0.05),而DDP组则明显高于对照组(P〈0.05),而PDTC+DDP组较DDP组明显降低(P〈0.05)。结论 PDTC能够增强顺铂的化疗敏感性,其耐药机制可能与其通过抑制NF-κB的表达及活化有关。
摘要:目的 本研究旨在通过二代测序技术分析非小细胞肺癌患者肿瘤组织中基因变异特征。方法 应用杂交捕获法的靶向二代测序技术检测108例非小细胞肺癌中56种基因的变异特征。结果 非小细胞肺癌肿瘤组织中TP53基因总突变类为37.96%(41/108)。EGFR基因总突变类为28.70%(31/108)。KRAS基因总突变率为11.11%(12/108)。PIK3CA基因总突变率为3.70%(4/108)。PTEN,VHL和NFE2L2基因总突变率为2.78%(3/108)。ERBB2和SMAD4基因总突变率为1.85%(2/108)。ERBB3,SMO,NRAS,SF3B1,FBXW7,DNMT3A,BRAF,ATM,CTNNB1,RB1和APC基因总突变率为0.93%(1/108),为D297N。结论 二代测序技术为明确非小细胞肺癌的发生发展机制、诊断及靶向治疗和预后提供更多有价值的信息。
摘要:目的 分析晚期肺腺癌程序性死亡配体1 (PD-L1)蛋白的表达与表皮因子生长受体(EGFR)基因状态之间的关系。方法 收集晚期肺腺癌患者的临床病理资料、EGFR基因状态及临床样本,使用免疫组化法检测PD-L1蛋白的表达,并其分期与临床病理特征、EGFR基因状态及表皮因子生长受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)一线治疗无疾病生存时间(PFS)之间的关系。结果 PD-L1蛋白在肿瘤细胞及肿瘤浸润免疫细胞表达的阳性率分别为78.7%(48/61)、59.0%(36/61),二者之间无统计学差异(P=0.669);PD-L1蛋白表达与年龄、性别、吸烟史、组织类型、分化级别、EGFR基因状态均无显著相关(P〉0.05);不同EGFR突变类型间PD-L1蛋白的表达水平亦无明显差异;一线EGFR-TKI治疗的PFS仅与EGFR突变类型(19del最佳,中位PFS 15.0±1.52个月,P〈0.0001)有关,而与肿瘤细胞PD-L1蛋白表达、肿瘤免疫细胞PD-L1蛋白表达、EGFR-TKI用药类型均无显著相关(P〉0.05)。结论 PD-L1蛋白在晚期肺腺癌的肿瘤细胞及肿瘤浸润免疫细胞均有表达,但二者之间无差异,且与EGFR基因状态、EGFR-TKI疗效未见明显相关性。
摘要:目的 性别决定区Y框蛋白9(SOX9)对肺腺癌细胞生长的影响及机制研究。方法 肺腺癌细胞A549转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2,同时转染小干扰RNA阴性对照,qRT-PCR和Western blot检测细胞中的SOX9 mRNA和蛋白,筛选干扰效率较高的小干扰RNA,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白水平。结果 转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2后的A549细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平均明显低于没有转染的细胞(P〈0.05),并且转染SOX9小干扰RNA1后的细胞SOX9 mRNA和蛋白水平下调更多,而转染小干扰RNA阴性对照的细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平与没有转染的细胞相比差异没有统计学意义(P〉0.05),后续选用转染SOX9小干扰RNA1后的A549细胞。下调SOX9表达后的A549细胞增殖活性较没有转染的细胞相比明显降低(P〈0.05),细胞凋亡率明显升高(P〈0.05),细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9水平升高(P〈0.05),β-catenin、c-myc水平降低(P〈0.05)。结论 下调SOX9抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞中Caspase-3、Caspase-9活化,抑制细胞中Wnt/β-catenin信号通路激活。
摘要:目的 探究肺癌化疗期间院内感染特点、高危因素和耐药性。方法 选取我院收治化疗的200例肺癌合并医院感染患者为研究对象,对患者的临床资料进行分析,并实施病原菌检测和药敏试验,进而对感染特点、感染高危因素以及耐药性进行分析。结果 本次研究共收治1980例肺癌患者,其中200例患者出现医院感染,医院感染率为10.10%。发生感染的部位主要集中在呼吸道、泌尿道、口腔黏膜、胃肠道以及其他部位,其所占比例分别为5.30%、0.35%、2.07%、1.87%、0.51%。在本次研究中共分离出病原菌238株,主要病原菌包括革兰阴性菌(80.67%)、革兰阳性菌(15.55%)以及真菌(3.78%)。革兰阴性菌耐药性最高的是环丙沙星,耐药性达到78.65%;革兰阳性菌耐药性最高为青霉素G,其耐药性为83.78%;真菌在氟康唑上有着高的耐药性,其耐药性为77.78%。肺癌患者发生医院感染在患者性别、年龄、临床分期比较上无统计学差异(P〉0.05),而在中性粒细胞、有无侵入性操作以及有无陪护情况比较存在显著差异(χ2=12.377、10.180、23.560,P〈0.05)。结论 在临床上对肺癌医院感染患者的感染特点、高危因素以及耐药性进行分析,进而对高危因素进行有效控制,根据病原菌的耐药性选择合适的抗菌药物,提高临床治疗效果以及预后。
摘要:目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)、鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因(KRAS)表达与伴微乳头结构的肺腺癌患者临床病理参数间的关系。方法 采用SP免疫组织化学染色方法 检测伴微乳头结构的肺腺癌组织及对应癌旁正常组织中EGFR及KRAS蛋白的表达,运用Western blot法检测伴微乳头结构的肺腺癌组织及对应癌旁正常组织中EGFR及KRAS蛋白的表达量,并分析EGFR及KRAS蛋白阳性表达情况与患者临床病理特征的关系,采用Spearman等级相关分析EGFR及KRAS在伴微乳头结构的肺腺癌组织中表达的相关性。结果 伴微乳头结构的肺腺癌组织中的EGFR与KRAS蛋白表达阳性率分别为74.4%(67/90)、83.3%(75/90),明显高于癌旁正常组织的15.2%(7/46)、19.6%(9/46)(P=0.025,0.018)。癌组织中EGFR、KRAS蛋白表达水平分别为0.7136±0.0652、0.8751±0.0347,明显高于癌旁正常组织的0.2148±0.0124、0.2308±0.0136 (P=0.032,0.029)。EGFR蛋白阳性表达率与TNM分期、淋巴结转移有关(P=0.022,0.015),KRAS蛋白阳性表达率与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P=0.017,0.024,0.011)。经Spearman相关分析显示,癌组织中EGFR与KRAS表达呈正相关(r=0.516,P=0.023)。结论 EGFR、KRAS蛋白表达在伴微乳头结构的肺腺癌组织中明显上调,且两者呈正相关的关系,在伴微乳头结构的肺腺癌发生及发展中具有重要作用。EGFR、KRAS检测可以作为早期诊断伴微乳头结构的肺腺癌的生物学指标。
摘要:目的 探究microRNA-491-5p(miR-491-5p)、Foxil在肺癌中的表达水平及临床意义。方法 收集2013年1月至2016年12月我院收治的86例肺癌患者石蜡包埋组织,同时取正常肺组织86例作为对照。实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测肺癌组织miR-491-5p水平;蛋白质印迹(Western blot)技术检测肺癌组织Foxil水平;结合临床资料分析miR-491-5p、Foxil与肺癌临床病理特征的关系。结果 ①qRT-PCR结果 显示,miR-491-5p在肺癌组织中的表达水平较正常肺组织显著降低(P〈0.05)。②Western blot结果 显示,Foxil在不同分期的肺癌组织中的蛋白表达水平较正常肺组织显著降低(P〈0.05)。③miR-491-5p、Foxil在肺癌患者中的表达与性别、年龄、组织类型、分化程度均无关(P〉0.05);miR-491-5p、Foxil在肺癌患者中的表达与TNM分期、淋巴结转移、存活状态均有一定关系(P〈0.05)。④肺癌组织中miR-491-5p表达水平与Foxil表达水平呈正相关(P〈0.05)。⑤Cox回归分析结果 显示,分期越晚的相对危险度为4.658(95%CI:3.408-21.476);miR491-5p高表达的相对危险度为0.317(95%CI:0.149-0.927);Foxil高表达的相对危险度为0.482(95%CI:0.374-0.892)。结论 miR-491-5p、Foxil在肺癌组织中的表达水平下调,与TNM分期、淋巴结转移、存活状态均有一定关系。
摘要:目的 探讨miR-211是否通过调控PTEN的表达而影响人肺鳞状细胞癌细胞体外增殖和侵袭能力。方法 通过双荧光素酶报告证明PTEN为miR-211的下游靶基因,miR-211及其阴性对照(miR-N.C.)转染人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H520,观察细胞中PTEN的mRNA水平和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖实验、细胞周期实验和侵袭实验(Trans-well),观察NCI-H520细胞体外增殖和侵袭能力的变化。结果 与对照组相比,miR-211可显著降低荧光素酶的表达活性(70.6%vs100%,χ2=28.331,P=0.001)。miR-211靶向作用PTEN可使NCI-H520细胞中mRNA表达水平较对照下调78.9%(χ2=114.973,P=0.045),而蛋白水平则下调71.4%(χ2=113.318,P=0.025)。miR-211处理后第3天,NCI-H520细胞的增殖能力比对照组细胞增高32.6%(χ2=27.143,P=0.031)。而细胞周期实验表明与阴性对照相比,miR-7-5p处理组的NCI-H1975细胞,其S期所占比例显著上调(19.2%vs32.7%,χ2=5.221,P=0.013),而G0/G1期所占比例则显著降低(67.8%vs 55.1%,χ2=2.973,P=0.026)。相比对照组,miR-211可将NCI-H520细胞的侵袭能力上调约47.3%(χ2=48.937,P=0.035)。结论 MiR-211主要是通过靶向抑制PTEN表达增强人肺鳞状细胞癌的增殖和侵袭能力。
摘要:目的 探讨在肺癌联合化疗过程中,紫杉醇脂质体药代动力学参数Tc〉0.05与肺癌化疗近期肿瘤指标之间的相关性;并探究Tc〉0.05值与肺癌化疗后副反应的相关性。方法 选取14例病理学确诊的肺癌患者。所有患者接受紫杉醇脂质体联合卡铂的化疗方案,采用胶乳免疫比浊法检测患者血浆中紫杉醇脂质体的浓度,并应用紫杉醇脂质体群体药代动力学模型计算软件推算出Tc〉0.05。通过病案记录采集病人信息,探讨Tc〉0.05及紫杉醇脂质体血药浓度和化疗近期肿瘤指标的关系,以及与毒副反应的相关性。结果 Tc〉0.05在化疗近期肿瘤指标变化上无明显统计学差异(P〉0.05)。最常见的副反应白细胞下降Ⅰ-Ⅱ度和Ⅲ-Ⅳ度与Tc〉0.05值有统计学差异(P〈0.05),Ⅲ-Ⅳ度白细胞下降患者所测Tc〉0.05值高于Ⅰ-Ⅱ度白细胞下降者Tc〉0.05值。结论 紫杉醇脂质体药动参数Tc〉0.05值与肺癌患者近期肿瘤指标相关性不显著。紫杉醇脂质体联合化疗最常见的副反应中,Tc〉0.05值越高,患者越倾向于出现白细胞Ⅲ-Ⅳ度下降。