不同果糖喂养状态下大鼠肝脏的内参基因稳定性分析

作者:王尚; 姚玲; 马朋; 蒋丽蓉; 柯大智; 刘丽; 李金秀; 姜蓉; 王建伟

摘要:分析取材前不同果糖喂养(禁食给清水和禁食给果糖水)条件下,大鼠肝脏常用内参基因m RNA的稳定性,筛选出最适宜的内参,以保证实时荧光定量PCR(real-time PCR)结果的可靠性。长期给予10%果糖水建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,在动物体重与饮用果糖量相等的情况下,取材前随机分成两组:禁食给清水组(Fru 1);禁食继续给果糖水组(Fru 2);正常对照组(Con)自由饮清水。提取肝脏样本RNA,取等量RNA逆转录合成c DNA,real-time PCR检测18S、GAPDH、ACTB和TBP含量变化,分别利用ge Norm程序和Bio-Rad CFX Manager软件分析这几个基因的稳定性。ge Norm分析得到的稳定性排序为:ACTB〉GAPDH〉TBP〉18S。Bio-Rad CFX Manager软件稳定性排序为:ACTB〉TBP〉GAPDH〉18S。两个软件均得到ACTB最为稳定,TBP次之。然而经3次重复逆转录基因表达分析,相对于Con组和Fru1组,Fru 2组ACTB与GAPDH明显升高,18S略有下降,TBP在3组间比较稳定。结合肝脏脂质合成相关的两个关键基因Ch REBP,SREBP1c表达变化分析,分别以这4种基因为内参计算这两个基因在3组间的含量变化。只有以GAPDH为内参时,Fru 2组Ch REBP表达量相对于Fru 1没有明显上升,其它的表达趋势一致,只是含量高低有所区别。因此,我们认为TBP和ACTB均可作为不同果糖喂养状态下大鼠肝脏的内参基因。

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关键词:
  • pcr
  • 内参基因
  • ge
  • norm
  • 非酒精性脂肪肝
  • 果糖

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期刊名称:基因组学与应用生物学

期刊级别:北大期刊

期刊人气:9276

杂志介绍:
主管单位:广西大学
主办单位:广西大学
出版地方:广西
快捷分类:农业
国际刊号:1674-568X
国内刊号:45-1369/Q
邮发代号:48-213
创刊时间:1982
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
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综合影响因子:0.89