一种快速高效的基于CcdB致死基因和SmaⅠ酶切位点的克隆体系构建

作者:党会杰; 刘秦; 许文茸; 张传玲; 王森; 涂鲁迪; 牛晓磊

摘要:PCR片段快速准确的构建到克隆载体是分子生物学实验的关键技术之一。快速高效低背景克隆体系的建立可以显著提高PCR产物的克隆效率及大大缩短克隆时间。本实验室开发出一种在常规条件下进行快速高效PCR连接的克隆体系。本研究将含有ccd B致死基因的gateway cassette片段,插入p UC18载体,成功构建p UC18-Ccd B致死载体,在此基础上结合ccd B致死基因内部的SmaⅠ酶切位点,开发出将PCR产物、SmaⅠ限制性内切酶、T4连接酶及p UC18-Ccd B致死载体一起加入离心管后共孵育10 min,即可转化大肠杆菌。对插入片段的重组质粒进行了酶切,PCR和测序验证,证实了该克隆体系高效可行,具有极高的阳性克隆率。该体系的建立具有高效低背景的特点,并且极大的减少了克隆步骤,省去了胶回收及双酶切过程,缩短了克隆时间,同时继承了p UC18载体的优点,具有很强的应用性及推广性。

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关键词:
  • 快速高效
  • 克隆体系
  • ccdb基因

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期刊名称:基因组学与应用生物学

期刊级别:北大期刊

期刊人气:9227

杂志介绍:
主管单位:广西大学
主办单位:广西大学
出版地方:广西
快捷分类:农业
国际刊号:1674-568X
国内刊号:45-1369/Q
邮发代号:48-213
创刊时间:1982
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:1.11
综合影响因子:0.89