摘要：为了得到高纯度眼镜蛇毒细胞毒素-4N，探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N（cytototxin-4N，CTX-4N）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC-T6）的增殖抑制作用。本研究采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prepHighS阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。在每一步分离纯化过程中，采用CCK-8法检测各蛋白峰组分对HSC-T6细胞的增殖抑制作用活性，收集增殖抑制作用最强的CTX-4N峰。经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度，Nano-LC-ESI．MS／MS质谱方法鉴定其组分，Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂检测CTX-4N对肝星状细胞（HSC-T6）的增殖抑制作用，从而确定其药理作用。经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prepHighS阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白，蛋白质谱鉴定为CTX-4N，分子量约为9．605kD。不同浓度的CTX-4N作用HSC-T6细胞24h后，随着其浓度的增大对HSC-T6细胞增殖抑制作用越强，呈剂量-效应关系，IC殉为（12．836±0．045）μg／mL。因此，本研究建立一种眼镜蛇毒细胞毒素一4N的分离纯化方法，并确定了其对HSC-T6细胞的增殖抑制的药理作用随浓度的增加而增强，为进一步研究其药理作用提供一定的理论依据。