基因组学与应用生物学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

基因组学与应用生物学 2017年第05期杂志 文档列表

基因组学与应用生物学杂志分子医学与临床应用

siRNA沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的影响1686-1691

摘要：合成Survivin小干扰RNA（small interfering RNA,si RNA）序列,用于转染人鼻咽癌细胞株CNE2,体外观察Survivin si RNA转染后CNE-2细胞Survivin m RNA、蛋白的表达、细胞增殖和凋亡情况。设计合成3段特异性Survivin si RNA,用si RNA转染鼻咽癌CNE-2细胞株,设置空白对照和阴性对照组,通过Real-time PCR检测CNE-2细胞的Survivin m RNA相对表达量,Western blotting检测Survivin蛋白的表达,流式细胞术及原位细胞凋亡检测转染后细胞凋亡情况。si RNA转染CNE-2细胞后,si RNA 1组和3组m RNA表达抑制率分别为（68.46±7.94）%、（49.44±3.78）%,si RNA 2组结果无显著差异（p〉0.05）。蛋白相对表达量只有si RNA 1组降低,表达抑制率为（30.61±2.47）%,流式细胞术和原位细胞凋亡检测转染后CNE-2细胞数量明显降低,细胞凋亡比例增高。si RNA干扰沉默Survivin基因能有效抑制CNE-2细胞的增殖和诱导细胞凋亡。本研究为Survivin基因可能作为治疗鼻咽癌的一个靶点,为Survivin基因沉默可能是治疗鼻咽癌高效的途径提供体外实验支持。

下调CDH17基因对那可丁耐药性人胃癌细胞作用的分析1692-1696

摘要：探讨下调肝肠钙黏连蛋白（CDH17）基因对抑制那可丁耐药性人胃癌MGC-803细胞增殖的分子机制,为临床治疗胃癌提供新的治疗手段。本研究以人胃癌MGC-803细胞为研究材料,通过体外MTT实验检测细胞活力、流式细胞术观察细胞增殖与凋亡情况,蛋白免疫印迹检测凋亡通路相关蛋白的表达水平变化。那可丁药物处理实验和MTT实验表明,下调CDH17可以提高人胃癌MGC-803细胞对那可丁的敏感性;流式细胞术观察结果表明,下调CDH17基因促进引起细胞凋亡;蛋白免疫印迹实验表明线粒体途径参与那可丁诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的过程。综上所述,下调CDH17基因通过提高人胃癌MGC-803细胞对那可丁的敏感性,引起线粒体途径相关蛋白功能障碍促进细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。

MDR1基因沉默增强紫杉醇诱导SGC7901/ADM细胞凋亡的敏感性1697-1701

摘要：为了探讨MDR1基因沉默对紫杉醇诱导人胃癌SGC7901/ADM细胞凋亡的影响,本研究构建靶向MDR1基因重组干扰载体,稳定转染SGC7901/ADM细胞,流式细胞术检测P-gp外排泵功能。激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂情况。结果发现,构建的sh RNA表达载体p Silencer 2.1-U6 neo-MDR1稳定转染SGC7901/ADM细胞后,细胞内Rho-123相对荧光强度升高;激光共聚焦显微镜下观察到,细胞形态发生改变,出现凋亡特征,与SGC7901/ADM细胞相比,经紫杉醇处理后SGC7901/ADM-2.1-3细胞的DN段化更为明显。结果表明,MDR1基因沉默增强了紫杉醇诱导SGC7901/ADM细胞凋亡的敏感性。

miR-133b与miR-155在非小细胞肺癌患者肿瘤及周围组织中的表达及意义1702-1708

摘要：探讨mi R-133b与mi R-155在非小细胞肺癌患者肿瘤及周围组织中的表达及意义。选择在湖北科技学院附属第一医院接受治疗的47例非小细胞肺癌患者作为研究对象,收集其肺癌组织和周围正常组织标本,采用Real-time PCR检测mi R-133b和mi R-155在肿瘤及周围组织中的表达情况,分析其与患者临床和病理特征之间的相关性。结果显示,肿瘤组织中mi R-133b相对表达量为221.4±1.013,周围正常组织为605.8±1.001,两者比较差异显著（p〈0.05）;肿瘤组织中mi R-155相对表达量为643.2±1.118,周围组织为386.9±1.097,两者比较差异显著（p〈0.05）。即Real-time PCR检测患者肿瘤组织中的mi R-133表达明显低于周围正常组织,mi R-155的表达明显高于周围正常组织;mi R-133b和mi R-155的表达与患者年龄、性别、病理类型无明显相关性;而与临床分期和淋巴结转移情况明显相关（p〈0.05）,其中mi R-133b表达水平与淋巴结转移呈明显负相关,mi R-155表达水平与淋巴结转移呈明显正相关;mi R-133b的表达还与肿瘤分化程度明显相关（p〈0.05）。综上所述,mi R-133b和mi R-155的异常表达与非小细胞肺癌的发生和发展密切相关,对二者表达水平进行检测有助于及早发现、筛选和诊断非小细胞癌患者,对患者预后评估具有一定临床价值。

封面图片介绍1708-1708

摘要：脑珊瑚属珊瑚虫纲石珊瑚目，呈圆形，表面有深深的凹槽，其群体骨骼与共肉部分相连，有的像是地毯密布、有的是起伏不平的疙瘩状，呈现出如人脑般的纹路。脑珊瑚圆形构造有助于它们承受海浪的冲击。根据不同的共肉色彩和形体，分为扁脑珊瑚、玫瑰形脑珊瑚、蜂巢形脑珊瑚、弹坑形脑珊瑚、奋厘脑珊瑚等。

Micro302A、Micro498、Micro520E在兔关节软骨细胞损伤后的表达变化1709-1714

摘要：本试验为了检测和比较在正常和划伤后的兔软骨细胞中Micro302A、Micro498、Micro520E 3种Micro RNA的水平变化。获取兔膝关节软骨细胞进行原代培养后制备细胞损伤模型。利用实时定量PCR对正常软骨细胞以及损伤后1 d、3 d、5 d、7 d 4个时间点软骨细胞内3种Micro RNA水平进行检测。结果表明成功获取兔膝关节软骨细胞进行原代培养后制备了细胞损伤模型。经过实时荧光定量PCR检测对比后发现：Micro302A与正常组相比在损伤后第1天明显升高,第3天升至最高,第5天降至接近正常组水平后持续下降,第7天降至最低。Micro498在损伤后第1天与正常组相比没有明显变化,后快速上升并在第3天达到顶峰后缓慢下降,在第7天达到与正常组相似水平。Micro520E的水平变化在4个时间点内较稳定,幅度较小。第1天至第3天稳步上升至最高后再逐步降低,第7天略低于正常组水平。在关节软骨损伤后不同的时间内,Micro302A、Micro498、Micro520E有明显不同的水平变化,说明这3种Micro RNA在关节软骨损伤后的修复过程中发挥不同的作用,为利用Micro RNA治疗关节软骨损伤提供了一定的实验依据。

Hsp90特异性抑制剂对HeLa宫颈癌细胞p53蛋白表达的影响1715-1720

摘要：HSP90抑制剂作为新型抗肿瘤药物,其治疗肿瘤效果良好,是目前抗肿瘤新药研发的热点。本研究目的在于探讨Hsp90特异性抑制剂对宫颈癌hela细胞增殖、凋亡影响及其调节p53通路的作用机制。利用HSP90抑制剂干预宫颈癌hela细胞24 h、48 h、72 h后细胞生长抑制率情况,观察HSP90抑制剂作用宫颈癌hela细胞48 h后细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）及p53蛋白水平变化的影响。结果表明,HSP90抑制剂可导致宫颈癌hela细胞形态学改变,增加细胞通透性,破坏细胞膜导致细胞破碎脱落。HSP90抑制剂能有效抑制宫颈癌hela细胞,可抑制细胞增殖并促进宫颈癌hela细胞凋亡,且呈剂量及时间依赖性。在细胞培养48 h后随HSP90抑制剂浓度增加,Caspase-3、Caspase-8、p53表达显著增加。结果表明HSP90抑制剂能可通过上调Caspase-3、Caspase-8、p53蛋白表达而诱导宫颈癌hela细胞凋亡。

乳腺导管内增生性病变中RGS2的表达及意义1721-1726

摘要：G蛋白调节因子2（G protein regulating factors2,RGS2）表达水平的变化与多种肿瘤的发生、发展有密切关系。为了解RGS2蛋白表达水平与乳腺导管内增生性病变（intraductal proliferative lesions,IDPLs）的关系。应用免疫组化对RGS2,CK5/6进行染色,观察其在98例IDPLs（15例普通型导管增生,11例非典型导管增生,72例导管原位癌）和正常乳腺组织的表达情况。结果显示,在普通型导管增生中RGS2的表达水平分布不一致,而在其余各型的IDPLs中RGS2蛋白的阳性表达呈均匀性分布;CK5/6蛋白的阳性表达只存在于普通型导管增生中,而其余各型IDPLs均不表达;在IDPLs中RGS2的表达水平与CK5/6的表达水平呈负相关性（r=-0.995,p=0.000）;随着IDPLs的级别增高,RGS2的表达逐渐丢失。结果表明,RGS2与CK5/6的联合应用可用于对IDPLs的鉴别诊断;RGS2可能作为检测IDPLs生物学行为和判断IDPLs患者预后的一项重要指标。

γ-分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对BMSCs向肺泡上皮细胞分化的影响1727-1731

摘要：为探讨γ-分泌酶抑制剂（DAPT）阻断Notch信号通路对BMSCs分化肺泡上皮细胞过程中的影响。本研究采用BMSCs与MLE-12非接触共培养,并在共培养中加入DAPT,实验分3组：空白对照组、共培养组、DAPT共培养组。共培养10 d后用光镜观察BMSCs的形态结构变化,Western blotting和RT-q PCR检测Notch信号通路相关基因Notch1,Ⅱ型肺泡上皮细胞特异性表面活性蛋白（surfactant protein C,SPC）、Ⅰ型肺泡上皮细胞标志水通道蛋白（aquaporin 5,AQP5）的表达。结果表明共培养10 d后的BMSCs变为似铺路石样上皮细胞形态;和空白对照组相比,共培养组、DAPT共培养组中Notch1、SPC、AQP5蛋白及m RNA表达升高（p〈0.05）;与共培养组相比,DAPT共培养组中Notch1、SPC、AQP5蛋白及m RNA的表达减少（p〈0.05）。因此推测BMSCs在MLE-12诱导下可以定向分化为肺泡上皮细胞,且分化的过程中Notch信号通路被激活,DAPT阻断Notch信号通路能抑制BMSCs分化为肺泡上皮细胞。

食蟹猴腹腔注射低剂量百草枯致胰腺α-突触核蛋白的病理变化1732-1736

摘要：本研究旨在通过食蟹猴经腹腔注射低剂量百草枯来探讨胰腺α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）的病理变化。由广西南宁灵康赛诺科生物科技有限公司提供的12只（8~10岁）健康雄性食蟹猴为实验动物,随机分为实验组A、B和正常对照组C,每组4只,实验组分别于给药百草枯（paraquat,PQ）5个月,2个月后安乐死（对照组每阶段2只）。利用免疫组织化学方法和免疫蛋白印记方法检测各组食蟹猴胰岛α-syn的表达特点和表达量。结果显示,α-syn免疫活性物质主要见于胰岛细胞胞浆,并且α-syn在各组食蟹猴胰岛存在差异表达,其中给药百草枯5个月后的食蟹猴胰岛α-syn表达量最高,对照组表达量最低。我们的研究表明食蟹猴腹腔注射低剂量百草枯可致胰岛α-syn表达上调,百草枯是造成胰岛腺α-syn差异表达的关键因素之一,其结论将为相关疾病的模型制作、早期诊断及干预提供新的思路。

稳定干扰ITGB1抑制人乳腺癌BT549细胞迁移和侵袭1737-1742

摘要：在人乳腺癌细胞系BT549中稳定干扰整合素β1（integrinβ1,ITGB1）,研究其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向干扰ITGB1基因的sh RNA慢病毒,感染BT549细胞,通过筛选成功获得稳定干扰ITGB1蛋白的BT-549细胞系,实验设空白对照组（Blank）、病毒感染阴性对照组（sh NC）、ITGB1-sh RNA慢病毒感染组（sh ITGB1）;Real-time PCR和Western blotting法检测稳定干扰后ITGB1 m RNA和蛋白的表达情况;Western blotting法检测稳定干扰ITGB1后上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标志蛋白（E-cadherin,Vimentin,N-cadherin,Fibronectin）的表达情况;利用划痕试实验和Transwell侵袭试实验分别检测稳定干扰ITGB1后细胞的迁移及侵袭能力。Real-time PCR和Western blotting结果显示,sh ITGB1组细胞ITGB1 m RNA和蛋白的表达水平显著低于Blank组和sh NC组细胞（p〈0.01,p〈0.01）。Western blotting结果显示,稳定干扰ITGB1可部分逆转乳腺癌细胞BT549的EMT化;稳定干扰ITGB1后,上皮标志蛋白E-cadherin表达显著上调（p〈0.01）,间质标志蛋白Vimentin（p〈0.05）、N-cadherin（p〈0.01）和Fibronectin（p〈0.01）的表达显著降低。划痕和Transwell侵袭试验实验结果显示,稳定干扰ITGB1后可显著降低乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力（p〈0.05,p〈0.05）。在乳腺癌BT549细胞中稳定干扰ITGB1后,通过逆转EMT化抑制细胞迁移和侵袭。

优秀赛艇运动员ACE基因I/D多态性与耐力表型的关联研究1743-1748

摘要：血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与人类耐力表型相关。本研究采用cross-sectional方法研究35名赛艇运动员ACE基因I/D多态性与耐力表型指标最大摄氧量（VO2max）、相对最大摄氧量（VO2max/kg）,肺活量,肺活量/体重之间的差异。研究结果表明,赛艇运动员ACE基因频率经卡方检验符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,Ⅰ等位基因频率为67.2%,D等位基因频率为32.8%,基因型频率分别为Ⅱ型为42.8%,ID型为48.6%,DD型为8.6%,ID〉Ⅱ〉DD型,组间卡方检验有显著性差异（p〈0.05）。ID与DD基因型之间VO2max、肺活量/体重均存在显著性差异（p〈0.05）,而其他基因型之间的指标比较无显著性差异。赛艇运动员ACE基因I/D多态性与耐力表型有关,Ⅰ等位基因表达高于D等位基因,更倾向于Ⅱ和ID型。

JMP定制实验设计优化胃癌患者PBMC分离方案1749-1754

摘要：为探索胃癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）分离的优化条件,本研究用JMP10.0软件定制设计方法,研究离心时间、离心速度对PBMC离心厚度的影响,建立模型、刻画最优参数,验证并用台盼蓝染色观察优化条件下离心的PBMC细胞存活率。结果表明,离心时间、离心速度与PBMC厚度存在曲线关系,离心时间与离心速度的交互作用无统计学意义。预测模型的决定系数R2=0.88,预测值与实际值的一致性较好。刻画最优离心时间=10 min,离心速度=2 307 r/min,PBMC厚度预测值=2.596 923 mm,95%CI（2.342 13,2.851 71）,验证离心的PBMC厚度=2.7 mm,细胞存活率=95%。本研究采用JMP定制设计方法优化PBMC离心条件,可为标准操作程序的建立提供基础。

miR-421下调FOXO4增强鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性1755-1761

摘要：鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）在头颈部肿瘤中位居首位,对人们的身体健康构成严重威胁。放射治疗是目前治疗鼻咽癌的有效手段,但是鼻咽癌组织存在对放射射线不敏感的细胞,这对放疗敏感性提出了更高要求。为探究mi R-421下调FOXO4对鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性的作用,本研究先对mi R-421靶基因进行预测,然后考察不同放疗剂量对mi R-421和FOXO4 m RNA表达水平的影响,直接证明mi R-421及FOXO4与鼻咽癌细胞放疗敏感性有关,最后通过存活曲线、流式细胞仪检测、MTT法,探究了mi R-421上调、FOXO4沉默对鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性的影响。结果发现,FOXO4为mi R-421的潜在靶基因,鼻咽癌细胞CNE-2经放射处理后,mi R-421的表达水平明显下降,FOXO4的表达水平显著升高;mi R-421上调和FOXO4沉默均增强了鼻咽癌细胞放疗的敏感性,降低了癌细胞存活率和克隆形成率,提高了的癌细胞凋亡率。可得知,mi R-421通过负调控FOXO4靶基因增强鼻咽癌细胞CNE-2放疗的敏感性,这为进一步深入研究mi R-421对其靶基因FOXO4的作用机制打下基础。

Legume Genomics and Genetics （LGG）1761-1761

p14.5过表达抑制肝癌细胞株SMMC7721迁移1762-1768

摘要：本课题组前期研究发现14.5 k D蛋白（以下简称p14.5）是肝癌相关抗原,目前研究发现p14.5在人体大部分正常器官组织内几乎不表达,仅在肝、肾组织内高表达;在多种肝癌细胞株和肝癌组织内p14.5m RNA和蛋白呈低表达,并与肝癌分化状态呈负相关。但是p14.5是否在肝癌发生发展中发挥作用还未明确。本研究采用Western blotting检测多种肝癌细胞株SK-Hep-1、Huh-7、Hep G2、SMMC7721和BEl-7704内p14.5蛋白表达;采用lipo3000脂质体介导构建p14.5稳定过表达肝癌细胞株p14.5-SMMC7721和空载对照细胞株NC-SMMC7721,并用Real-time QRT-PCR和Western blotting检测转染细胞株及野生型细胞株内p14.5的表达;通过CCK-8实验方法,检测p14.5过表达对肝癌细胞增殖的影响;通过体外划痕和Transwell细胞迁移实验检测p14.5过表达对肝癌细胞迁移的影响。结果显示,Real-time QRT-PCR及Western blotting检测结果表明p14.5在p14.5-SMMC7721细胞内表达明显高于其他两组,已成功构建p14.5稳定表达的肝癌细胞系p14.5-SMMC7721;CCK-8法测定细胞生长曲线结果表明p14.5稳定表达的肝癌细胞株与其他两组生长速度并无明显差异;24 h、48 h后观察划痕愈合情况,p14.5-SMMC7721愈合率为（6.97±1.55）%、（11.16±1.49）%,低于NC-SMMC7721愈合率（28.28±3.71）%、（46.89±6.76）%及野生型SMMC7721愈合率（30.50±3.66）%、（43.00±2.43）%,且差异有统计学意义（p〈0.05）。Transwell细胞迁移实验表明,p14.5-SMMC7721中发生迁移的平均细胞数目为12.70±4.92,而NC-SMMC7721及野生型SMMC7721中发生迁移的细胞数目为41.20±11.55和40.20±8.04,p14.5-SMMC7721中发生迁移细胞数目显著低于对照系NC-SMMC7721及野生型SMMC7721中发生迁移的细胞数目,且差异有统计学意义（p〈0.05）。本研究证实过表达p14.5,不影响肝癌细胞SMMC7721细胞生长,但是抑制其体外迁移。提示p14.5在肝癌细胞SMMC7721迁移中有重要作用。

地塞米松干预对哮喘大鼠气道形态、肺组织Galectin-8及ERK1/2表达的影响1769-1774

摘要：为探讨地塞米松对哮喘大鼠气道形态、肺组织半乳糖凝集素-8（Galectin-8）、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达情况的干预作用,本研究选取SPF级健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、哮喘组和地塞米松组,每组10只,哮喘组和地塞米松组大鼠采用卵清白蛋白致敏与激发,建立大鼠哮喘模型。其中,地塞米松组在每次激发前给予地塞米松干预,对照组用生理盐水腹腔注射和雾化吸入。采用图像分析技术测定各组气道壁形态指标,免疫组化、RT-PCR检测Galectin-8、p-ERK1/2、Galectin-8 m RNA和ERK1/2 m RNA的表达。在气道壁厚度、平滑肌厚度、Galectin-8、ERK1/2表达上,哮喘组较对照组均显著增加（p〈0.05）;地塞米松组较哮喘组均明显降低（p〈0.05）,但仍高于对照组（p〈0.05）。相关性分析显示：哮喘组大鼠气道壁厚度、平滑肌厚度与Galectin-8、Galectin-8 m RNA、p-ERK1/2及ERK1/2 m RNA呈正相关。研究说明,Galectin-8和ERK1/2可能参与了大鼠哮喘气道重塑过程,而地塞米松干预可抑制气道壁厚度和平滑肌厚度,并显著降低Galectin-8和ERK1/2表达。

当归多糖延缓5-氟尿嘧啶所致人骨髓基质细胞衰老1775-1782

摘要：探讨5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对人骨髓基质细胞（human bone marrow stromal cell,h BMSC）的损伤作用机制;当归多糖（angelica sinensis polysaccharides,ASP）对5-氟尿嘧啶损伤h BMSC的保护作用。采用CCK-8法测定人骨髓基质细胞株HS-5对不同浓度5-FU（0μg/m L,12.5μg/m L,25μg/m L,50μg/m L和100μg/m L）的敏感性。流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞;DCFH-DA荧光染色流式检测胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;酶学法检测谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量;流式细胞术分析γH2AX表达水平;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHd G）的含量;5-FU 12.5~100μg/m L抑制HS-5增殖,抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。5-FU组较与对照组相比细胞周期发生G1期阻滞,β-半乳糖苷酶染色阳性率升高;胞内ROS含量显著升高;细胞抗氧化能力降低;γH2AX和8-OHd G表达水平增高。ASP治疗组较5-FU组细胞相比细胞周期阻滞减少;衰老细胞比率降低;胞内ROS含量显著降低;细胞抗氧化能力升高;DNA损伤指标表达水平降低。5-FU可通过增强氧化应激诱发DNA损伤致骨髓基质细胞衰老;ASP对骨髓基质细胞损伤有保护作用,其机制可能与ASP降低损伤后骨髓基质细胞氧化应激减轻DNA损伤从而延缓骨髓基质细胞衰老有关。