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摘要:为探讨双依他尼酰乙二胺(EDEA)对人耐顺铂卵巢癌细胞(COC1/DDP)的抗肿瘤活性,本实验用CCK-8细胞增殖实验检测顺铂(DDP)及双依他尼酰乙二胺对细胞生长的抑制作用,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测细胞内Bcl-2家族凋亡相关蛋白表达,瑞氏染色观察细胞形态。结果显示,EDEA对人正常细胞HEK293、LO2的低毒剂量接近1.2μmol/L,DDP对上述细胞低毒剂量约1.0μmol/L。分别作用COC1/DDP细胞24 h、48 h、72 h后,EDEA的半抑制浓度IC50均为0.67μmol/L,但DDP对应IC50分别为52.9μmol/L、18.1μmol/L和15.2μmol/L。在浓度均为1.0μmol/L时,EDEA作用COC1/DDP细胞48 h后其凋亡率接近44%,而DDP作用此细胞48h后凋亡率仅约4%。与单用1.0μmol/L DDP处理相比,1.0μmol/L EDEA作用48 h后Bcl-2等抗凋亡蛋白下调,Bax等促凋亡蛋白上调,且p-Akt表达被抑制,细胞形态发生凋亡样改变。结论,EDEA对人正常细胞低毒剂量与DDP相当但对COC1/DDP有显著生长抑制作用,且药效远强于相同浓度DDP;EDEA对耐顺铂卵巢癌细胞COC1的生长抑制作用与p-Akt表达抑制和细胞凋亡增强相关。
摘要:利用PCR技术从基因组DNA中获得不同长度的Cx43基因启动子片段,克隆至荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成纤维细胞,通过荧光素酶活性检测,分析不同启动子区域的转录调控能力。结果显示Cx43基因不同长度的启动子荧光素酶报告基因载体被成功构建,它们在成纤维细胞中的活性不同:535--1区域可能为Cx43基因启动子的核心转录调控作用区,这为进一步研究Cx43在成纤维细胞中的转录调控特点奠定了基础。
摘要:为了观察金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对诱导人鼻钻膜上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的影响,并初步探讨其作用机制,本研究首先在体外培养人鼻黏膜上皮细胞株HNEpC,用不同浓度的SEB孵育细胞0~24 h,ELISA检测培养上清中MUC5AC和转化生长因子-α(TGF-α)的含量;实时定量PCR检测MUC5AC mRNA表达水平;Western blot分析表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化。同时采用肿瘤坏死因子转化酶(TALE)siRNA干扰其表达双察其对TGF-α分泌的影响最后采用TGF-α中和抗体、EGFR抑制剂AG-1478或TALE抑制剂TAPI处理细胞,观察其在介导MUC5AC分泌中的作用。结果显示,1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL SEB作用鼻黏膜上皮细胞24 h后,可明显诱导其分泌MUC5AC并表达其mRNA,且其分泌水平随着SEB浓度的增高或时间的延长而逐渐增多。SEB也能诱导鼻黏膜上皮细胞分泌TGF-α,并磷酸化EGFR。给予10μmol/L TALE抑制剂TAPI处理细胞后,TGF-α和MUC5AC分泌水平显著减少,采用TALE siRNA干扰其表达后,TGF-α和MUC5AC也得到了类似结果。采用TGF-α中和抗体预孵育细胞30 min后,可明显抑制EGFR磷酸化。此外,TGF-α和EGFR中和抗体以及AG-1478预处理也可降低MUC5AC分泌。以上结果表明SEB经TALE/TGF-α/EGFR诱导人鼻黏膜上皮细胞表达MUC5AC。
摘要:本研究选取2015年1月至2016年1月来我院就诊的183例急性缺血性脑卒中患者(脑卒中组)与同期就诊非脑卒中患者183例(对照组),分别进行DE4D基因多态性检测。对比两组中的SNP83发现脑卒中组基因型CC与CT分别高达77.05%、20.77%,而且C等位基因为87.43,均明显高于对照组;对比SNP87发现,在各基因型与等位基因的比较中,脑卒中组与对照组无明显差异。脑卒中组,SNP83与SNP87的CT、CC、TT基因型占比在对阿司匹林敏感患者中与对阿司匹林抵抗的患者中无明显差异。DE4D基因SNP83与急性缺血性卒中有密切联系,其中C等位基因越高,发病风险越高,相对应SNP87则与该疾病发生相关性较小,这可为早期诊断及预防缺血性脑卒中提供强有力的理论依据。
摘要:探讨半边旗二萜类成分Pteisolic acid G(PAG)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及作用机制。用不同浓度的PAG处理HepG2细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;采用PI单染法检测细胞周期分布;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western Blotting检测细胞内mRNA和蛋白表达情况;采用DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,采用ROS抑制剂乙酰半胱氨酸(NAC)评价PAG细胞增殖抑制作用对ROS的依赖性。结果表明,在24 h、48 h和72 h时,PAG可剂量依赖性地抑制HepG2细胞的增殖(p〈0.05),IC_(50)分别为64.8μmol/L,38.5μmol/L和24.8μmol/L;用药24 h时PAG可剂量依赖性地使HepG2细胞阻滞在G_2/M期,同时增加HepG2细胞凋亡率(p〈0.05);PAG可剂量依赖性地降低HepG2细胞内Bcl-2 mRNA和caspase 3、PARP、Bcl-2蛋白的表达(p〈0.05),增加Bax mRNA和actived-caspase 3、cleaved-PARP、Bax蛋白的表达(p〈0.05)。当使用1 mmol/L的ROS抑制剂NAC预处理HepG2细胞时,PAG对HepG2细胞增殖抑制作用被显著阻断。上述结果表明,半边旗二萜类成分PAG可提高Bax/Bcl-2的基因和蛋白表达比值,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,该作用可能是通过升高细胞内ROS水平来实现的。
摘要:采用水提醇沉法得到党参粗多糖(COP),采用Sevag法除去蛋白成份,接着通过Sephacry1 S-200HR及Sephadex G-25凝胶柱色谱分离得到均一多糖COP-1。凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定其纯度和平均分子量。高效液相色谱法(HPLC)确定其单糖的组成。红外光谱及核磁推测COP-1结构。结果表明COP-1平均分子量约为2.1×10~3 Da,且均由阶D-(2→1)呋喃果糖组成。
摘要:本研究旨在探讨单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)在GK大鼠不同时期脑组织的表达以及与认知功能的关系。选取42只雄性2型糖尿病大鼠(Goto-Kakizaki rat,GK rat)为模型组(GK组)模型组随机分为12周、24周、36周组海组14只,同源性Wistar大鼠14只为对照组。应用Morris水迷宫测验(MWM)检测不同时期GK大鼠以评价大鼠的认知功能;每组选7只大鼠行光镜下HE染色来观察海马CA1和CA3区形态病理学变化;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组剩余大鼠脑组织匀浆MCP-1的表达量。观察GK大鼠行为学及病理学的变化,探讨MCP-1与认知功能受损之间的关系。结果显示:1与同时期对照组相比,GK各组血糖水平显著升高(p〈0.01);GK大鼠24W和36W组较12W组显著升高(p〈0.05),36W和24W之间无统计学差异(p〉0.05);2GK组较同期对照组逃避潜伏期时间明显延长、跨过平台次数减少(p〈0.05);GK 12W、24W和36W,3组间逃避潜伏期时间和跨过平台次数均有统计学差异(p〈0.05);3对照组没有明显的组织病理学变化,GK组随喂养时间的延长,神经细胞逐渐排列紊乱、脱失、变形和坏死,胞质染色变浅不均,胞核固缩、破裂;4MCP-1蛋白在GK组脑组织匀浆中的表达量明显高于对照组(p〈0.05),GK 12W、24W和36W,3组间MCP-1表达量均有统计学差异(p〈0.05)。GK大鼠随喂养时间的延长,血糖升高至糖尿病水平从知功能逐渐下降,海马CA1和CA3区出现进展性的病理损害以及脑组织中MCP-1蛋白的高表达。MCP-1蛋白的表达量可能成为临床上判断2型糖尿病认知功能损害程度及预后的重要辅助参考指标。
摘要:本研究旨在评价红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)对植入药物洗脱支架(drugeluting stents,DES)的非ST段抬高急性冠脉综合征患者(non-ST elevation myocardial infarction,NSTE-ACS)远期预后的影响。研究纳入南方医科大学珠江医院2013年2月1日至2014年1月31日在心内科行经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)并植入DES的NSTE-ACS患者共181名,其中男性136例,女性45例,按照入院时的RDW的中位数分为2组;RDW≥13.3%为高RDW组,RDW〈13.3%为低RDW组。收集患者的相关临床资料采用门诊、电话等形式进行随访,比较两组患者之间长期生存率。纳入符合条件的患者181例,完成随访177例(97.8%),随访时间(14.67±5.78)月。2组患者基线资料中RDW血小板,受体阻滞剂(BETA BLOCK)比较,差异有统计学意义。高、低RDW两组患者随访结果显示,高RDW组全因死亡率及主要心脏不良事件(major adverse cardiac events(MACE))发生率与低RDW组比较有统计学差异,随访期间内靶血管再次血运重建的概率两组有统计学差异。Cox多元回归分析显示RDW升高是全因死亡和MACE发生率的预测因子,高RDW和LVEF≤40%与病死率相关。Kaplan-Meier曲线显示两组间全因死亡率和MACE事件发生率差异有统计学意义(Log-rank p=0.025,p=0.005)。本研究结果显示RDW升高是植入药物洗脱支架的NSTE-ACS患者不良临床预后的独立预测因子。
摘要:骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins,BMP9)是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族的一员,具有多种生物学功能。本实验主要是从体内、外两个层面模拟的脂肪微环境中,研究BMP9对乳腺癌细胞生长的影响。将前脂肪细胞3T3-L1诱导为成熟脂肪细胞后,利用Transwell小室共培养技术,将其分别与MDA-MB-231细胞、感染腺病毒AdGFP的对照MDA-MB-231/AdGFP细胞、感染腺病毒AdBMP9的MDA-MB-231/AdBMP9细胞进行共培养。针对共培养体系中的肿瘤细胞,采用EdU实验检测增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测cyclin D1、c-myc蛋白水平的变化。将乳腺癌细胞与脂肪细胞以1:5的比例混合后,注射到裸鼠皮下,监测瘤体的生长并绘制生长曲线;取离体肿瘤组织进行免疫组化染色,检测瘤体中ki67、cyclin D1和c-myc的表达情况。结果显示,显微镜下可以观察到诱导后的3T3-L1细胞出现明显脂滴,能被油红O染色,证明成熟脂肪细胞诱导成功;AT-PCR及Western blot证实BMP9过表达成功;BMP9可以抑制共培养体系中肿瘤细胞的增殖(p〈0.05),使其周期阻滞在G2/M期(p〈0.05),并降低cyclin D1和c-myc的蛋白水平(p〈0.05)。动物移植瘤实验发现,BMP9高表达实验组的瘤体明显小于空白组和载体感染对照组;瘤体免疫组化结果显示,实验组ki67、cyclin D1和c-myc的表达均明显下调。本研究证明在体内、外模拟的脂肪微环境中,BMP9可以抑制乳腺癌细胞的增殖,且这种作用可能是通过下调cyclin D1和c-myc来实现的。
摘要:为研究不同人工光源对恒河猴(Macaca mulatta)屈光发育和眼球发育的影响。本研究随机分平均年龄为95 d的12只恒河猴为全光谱组、荧光灯组、白炽灯组、紫光灯组4组,每组3只,对其进行光照(8 am~8 pm)海天12h光照前后2、4、6、8、12周分别对其眼球的屈光度、玻璃体腔深度、前房深度、眼轴长度、角膜曲率、晶体厚度等生物学参数进行重复测量,对各指标的变化趋势进行观察。采用重复测量数据的方差分析各时间点数据,有统计学意义的标准为p〈0.05。相关分析结果显示,光照前后各时间点全光谱灯组、荧光灯组、白炽灯组恒河猴的眼球屈光度、眼轴之间的差异均不显著(p〉0.05),紫光灯组恒河猴的眼球眼轴、玻璃体腔长度的增长速度、屈光度下降速度均显著慢于全光谱灯组、荧光灯组、白炽灯组(p〈0.05),但4组恒河猴光照后各时间点的晶体厚度、角膜曲率、前房深度之间的差异均不显著(p〉0.05)。从这里我们可以看出;恒河猴眼轴及玻璃体腔在短波长紫光诱导下具有较慢的延长速度及正视化进程速度,短波长紫光诱导恒河猴眼轴及玻璃体腔延长减速正视化进程减慢。全光谱灯组、荧光灯及白炽灯灯光在短期内(12周)尚未对恒河猴眼球的屈光发育产生明显影响,但是长期影响仍然需要相关医学学者进一步观察。眼球屈光发育在紫光的作用下发生改变的可能机制为视色觉通路信号对比在缺乏全面的光谱的情况下发生异常。
摘要:为研究产前MRI技术在产时胎儿手术中的应用价值,收集2014年12月至2015年8月在广东省佛山市妇幼保健院实施的4例产时胎儿手术的临床及影像资料,回顾性分析产前MRI对产时胎儿手术的实施所起到的作用及存在的不足。4例患者中胎儿脐膨出2例左侧先天性膈疝2例,产前MRI检查均明确了胎儿出生缺陷的种类及严重程度,对产时胎儿手术的制定发挥了重要的指导作用;但MRI对胎儿合并的支气管软化症及肺动脉高压未能进行有效评价,对合并的胎盘植入未能在产前检出,也给手术增加了风险。由此得出结论,产前MRI需与超声检查联合应用才能更好地提高胎儿宫内缺陷的检出率和临床应用价值。
摘要:钙离子结合酪氨酸磷酸化调节基因CABYR是一种与钙离子信号通路相关的基因,该基因具有两个编码区,编码产生一种高度多态性蛋白。CABYR蛋白定位于人精子鞭毛纤维鞘主段,与精子的能育力获得和鞭毛纤维鞘形成紧密相关。CABYR在睾丸组织和多种肿瘤组织中高表达,正常组织中不表达或低表达,并能引起特异性体液免疫反应,被鉴定为一种与肺癌相关的的CT抗原。CABYR的表达水平对肿瘤细胞的增殖、迁移和多种抗肿瘤药物敏感性起重要作用。CABYR在肿瘤免疫治疗、抗肿瘤药物筛选以及法医物证中精液斑的检验鉴定具有潜在应用价值。
摘要:本研究采用构建193只黔北麻羊DNA池并对其PCR结果直接测序和生物信息学分析的方法对MHC-DRB1基因的第三外显子进行遗传变异分析,旨在获得黔北麻羊MHC-DRB1基因的多态性,为MHC基因在山羊的抗病育种研究中提供基础资料。分析结果得到DRB1基因Exon3中共7个SNPs,分别为A^9G(Ile→Val)、G^120A(Gly→Ger)、C^125T、G^140A、T^245G(Asp→Glu)、C^251T、G^275A。生物信息学分析得到各突变位点均引起RNA二级结构的改变,各错义突变位点均引起蛋白质二级结构的改变,但并未引起抗原表位改变。