摘要:[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(hmnan mammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)扩增hMAM基因编码序列.将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQFA0连接、筛选、鉴定,构建pOE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTFG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40hMAM表达成功。
注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社