乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达

作者:刘秀娜; 王仙园; 周娟; 赵力军; 潘自铁; 胡川闽

摘要:[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(hmnan mammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)扩增hMAM基因编码序列.将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQFA0连接、筛选、鉴定,构建pOE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTFG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40hMAM表达成功。

分类:
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关键词:
  • 乳腺癌组织
  • 珠蛋白基因
  • 相关分子
  • 原核表达
  • 克隆
  • 基因编码序列
  • 逆转录聚合酶链反应
  • 聚丙烯酰胺凝胶电泳
  • 琼脂糖凝胶电泳

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期刊名称:护理研究

期刊级别:北大期刊

期刊人气:13220

杂志介绍:
主管单位:山西省卫生健康委员会
主办单位:山西医科大学第一医院;山西护理学会
出版地方:山西
快捷分类:医学
国际刊号:1009-6493
国内刊号:14-1272/R
邮发代号:22-130
创刊时间:1987
发行周期:半月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:1.38
综合影响因子:3.42