黑龙江医药科学杂志 省级期刊

黑龙江医药科学 2017年第06期杂志 文档列表

黑龙江医药科学杂志调查与实验研究

新生SD大鼠心肌细胞的原代培养1-2

摘要：目的：探讨乳鼠原代心肌细胞的培养方法,简便稳定地获得高存活率和纯度的心肌细胞。方法：无菌条件下取1~3d内新生SD大鼠的心室肌组织,首先用胰蛋白酶消化心肌组织一次,再用I型胶原酶短时多次消化,然后应用差速贴壁分离法和化学试剂抑制法纯化心肌细胞。对心肌细胞进行形态学观察、存活率检测和免疫荧光鉴定。结果：台盼蓝染色检测心肌细胞存活率在95%以上。培养24h后的心肌细胞已贴壁生长,呈梭形及多边形,有自发性搏动,48h后细胞伪足相互交织成网,进而形成细胞簇,呈现同步性搏动。免疫荧光鉴定心肌细胞纯度达96%。结论：此种方法能够可靠地获得较高存活率和纯度的原代乳鼠心肌细胞。

黑龙江医药科学杂志技术与方法

ALK2基因敲除小鼠的饲养繁育与基因型鉴定3-5

摘要：目的：为了繁育和鉴定体内ALK2基因被敲除的小鼠,特将从美国引进的ALK2基因敲除小鼠进行饲养繁育,继续保种;以及初步探究激活素受体样激酶2（Alk2）功能缺陷对出生后小鼠在生存能力、繁殖能力、主要组织器官的生长状态等方面的影响。方法：首先用Cre-loxp重组酶系统培育出ALK2条件基因敲除小鼠,通过基因型鉴定筛选出实验组（基因型：Osx-Cre;Alk2fx/fx）和对照组（基因型：Osx-Cre;Alk2fx/＋）。结果：成功饲养和繁殖出从美国引进的小鼠,并成功从中筛选出ALK2基因敲除小鼠。结论：采用正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对筛选出基因敲除小鼠及继续保种意义重大;初步探究小鼠ALK2基因敲除后小鼠的变化为进一步深入研究小鼠的组织器官的生长发育方面的变化及机理奠定了基础。

胃黏膜肠上皮化生的研究现状及进展6-8

摘要：胃癌目前的发病机制尚不明确,Lauren分型将胃癌按组织病理学分为胃型胃癌、肠型胃癌及混合型胃癌,其中肠型胃癌与胃黏膜上皮化生有密切联系,胃黏膜肠上皮化生作为肠型胃癌癌前病变的重要病理类型近年被广泛研究,该病理形式经研究发现与幽门螺杆菌感染、胆汁酸反流、不当的饮食习惯、吸烟、年龄及性别等流行病学因素有关,临床上通过根除幽门螺杆菌、定期的内镜监测及个体化治疗等防治手段控制其进一步进展。本文就胃黏膜肠上皮化生定义与分类、流行病学研究及危险因素、治疗方法作简介综述,旨在临床工作中提高对该病理转变的认识水平,更好的开展对胃癌的早期预防与监测。

黑龙江医药科学杂志临床研究

急性脑出血患者外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值的临床意义9-10

摘要：目的：探讨脑出血患者急性期检测外周血中性粒细胞（NEUT）、淋巴细胞（LYM）以及中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）临床意义。方法：选取发病48 h内的急性原发性脑出血患者90例,并选取同期健康体检者62例作为对照组。采用半导体激光流式细胞术检测NEUT、LYM计数;比较脑出血组及对照组间NEUT、LYM计数及中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）水平;根据是否合并感染及病程中是否死亡分组,分别比较上述指标在各两组间水平;利用受试者工作特征曲线（ROC）分析NLR对脑出血患者临床预测价值。结果：脑出血组NEUT、NLR均显著高于对照组（P〈0.05）,LYM显著低于对照组（P〈0.05）;脑出血死亡组NEUT、NLR明显高于存活组（P〈0.05）;NLR的死亡ROC曲线下面积为0.707。结论：急性脑出血患者外周血NLR显著增高;NLR可能与脑出血急性期（21d）死亡相关。

黑龙江医药科学杂志技术与方法

双参口服液中总黄酮和总皂苷的含量测定11-13

摘要：目的：探讨双参口服液中总黄酮和总皂苷的最佳提取工艺,并测定双参口服液中总黄酮和总皂苷的含量。方法：采用正交试验法进行总黄酮和总皂苷的最佳提取工艺的研究,采用紫外分光光度法,以总黄酮和总皂苷含量为指标,在510nm波长和536nm波长处对双参口服液中总黄酮和总皂苷进行含量测定。结果：双参口服液中总黄酮的最佳提取工艺为：样品比例为3：2：1（党参：沙参：玉竹）,料液比1：5,乙醇浓度80%,提取温度60℃,提取时间为50min时,总黄酮的平均含量最高可达为1.464mg·g-1;双参口服液中总皂苷的最佳提取工艺为：样品比例为3：2：1（党参：玉竹：沙参）,料液比3：25,浸泡时间48h,乙醇浓度60%时,总皂苷的平均含量最高可达0.344mg·g-1。结论：双参口服液中总黄酮和总皂苷采的提取工艺是可行的并且含量较高。

细胞衰老及在个体衰老中的作用14-15

摘要：衰老（aging）又称老化,是生物发育成熟后的一个持续发展的、动态的、缓慢的自身机能减退,结构、组分逐步退行性病变并趋向死亡的不可逆转的现象。衰老伴随的器官功能减退、细胞与分子水平改变往往渐进性影响健康,因此衰老与疾病和死亡密切相关。很多研究认为,个体衰老起始于微小的亚细胞损伤。亚细胞损伤本身并不能直接导致个体衰老,但如果损伤积累到一定程度,细胞就会停止增殖并出现衰老相关的分泌表型现象,最终出现肉眼可见的个体衰老表现,因而细胞衰老很可能是二者联系的纽带。

Balb/c3T3细胞转化电化学试验方法的研究16-18

摘要：目的：利用伏安行为的电化学方法研究Balb/c3T3细胞转化过程中嘌呤核苷酸代谢变化规律,确定细胞转化的电化学检测指标。方法：利用MNNG与TPA诱导Balb/c3T3细胞体外进行转化,同时利用ITEs进一步加速转化效率,在不同时间点对转化的细胞进行细胞形态学观察、软琼脂克隆实验及伏安行为电化学检测,电化学法跟踪BALB/c3T3细胞转化过程中嘌呤含量的变化。结果：实验第10天开始,转化细胞的嘌呤的信号峰值明显高于对照组（DMSO组）,细胞内嘌呤含量增多,同时细胞增殖加速。ITEs可缩短转化时间。结论：嘌呤可作为电化学法检测的生物标记物,伏安行为的的电化学法可以快速检测体外细胞发生恶性转化的过程,与传统方法相比,缩短了检测周期,有望成为一种简单、快速、灵敏、低成本的细胞转化检测新手段。

慢性高尿酸血症小鼠模型的制备和筛选19-21

摘要：目的：对比三种高尿酸血症小鼠模型的制备方法,以期建立稳定的慢性高尿酸血症小鼠模型。方法：分别采用酵母＋腺嘌呤、腺嘌呤＋乙胺丁醇和腺嘌呤＋氧嗪酸钾三种药物组合进行造模,灌胃给药;检测小鼠的血尿酸、肌酐等生化指标;石蜡包埋制作病理切片,应用苏木精-伊红染色观察肾脏病理变化。结果：试验第14天开始,各模型组小鼠的体重均下降,尤以酵母＋腺嘌呤组下降最明显,且血清中尿酸、血肌酐和血尿素等生化指标呈现明显的升高趋势。结论：通过酵母＋腺嘌呤建立的高尿酸血症小鼠模型的生化指标、病理变化更显著,该模型更接近于人高尿酸血症的病理变化。

黑龙江医药科学杂志调查与实验研究

林茜草根黄酮对S-180小鼠肿瘤TG-3、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ蛋白表达的影响22-24

摘要：目的：以林茜草根醇提取总黄酮为研究对象,干预其对小鼠S-180肉瘤的抑制作用,探究抗肿瘤机制。方法：以常规ELISA检测、IH测定和RT-PCR手段,测定其在瘤体中三种蛋白TGF-β1、MHC-I、MHC-Ⅱ的上调表达;以此探索TG-3在小鼠S-180肉瘤实体瘤表面免疫蛋白分子的分泌,从而说明其分泌蛋白增强瘤体的免疫应答作用强度,以此机制制约瘤细胞在模型鼠体内移动和定置。结果：肿瘤细胞MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ和MHC-ⅠmRNA模型组显著减少;抗肿瘤逃逸机制和植物醇提取物总黄酮组显著增加。结论：林茜草根总黄酮可能能提高和增强宿主的免疫功能从而抑制小鼠S-180荷瘤,达到抑制肿瘤目的。

连翘酯苷A对内毒素致鸡血白介素-17和白介素-6水平的影响25-27

摘要：目的：研究连翘酯苷A和内毒素作用鸡后,鸡脾器官指数、鸡血IL-17和IL-6 mRNA表达量与蛋白含量与炎症反应关系。方法：选取80只1d龄健康AA肉鸡随机分为4组,分别为control组,LPS组,30组（30 mg·kg-1连翘酯苷低剂量组）和60组（60mg·kg-1连翘酯苷高剂量组）,各组鸡收集鸡脾脏、血和血清,计算鸡脾脏器官指数、通过采用qRT-PCR和ELISA方法检测血液和血清中IL-17和IL-6水平。结果：与正常组相比,LPS组脾器官指数上升,血液中IL-17和IL-6 mRNA表达量升高;与LPS组比较,连翘酯苷A剂量组脾器官指数下降,血液中IL-17和IL-6 mRNA表达量下降;与正常组相比,LPS组血清中IL-17和IL-6蛋白含量升高;与LPS组比较,连翘酯苷A组血清中IL-17和IL-6蛋白含量下降。结论：试验表明连翘酯苷A可以通过基因和蛋白水平抑制LPS诱导的鸡血中IL-17和IL-6 mRNA表达量和蛋白含量的升高,起到免疫调节作用,达到抗炎效应。

黑龙江医药科学杂志技术与方法

盐酸法舒地尔脂质体的制备28-30

摘要：目的：制备盐酸法舒地尔脂质体,探讨制备盐酸法舒地尔脂质体的最优处方及最佳制备工艺。方法：采用醋酸钙梯度法制备盐酸法舒地尔脂质体。以包封率为考察指标,在单因素实验基础上,通过正交试验优化最优处方及最佳制备工艺,采用紫外分光光度法对盐酸法舒地尔脂质体包封率进行测定。结果：最终确定制备盐酸法舒地尔脂质体的最优处方及最佳制备工艺为药脂比1：20、孵育时间1.5h、醋酸钙浓度100mmol/L、孵育温度45℃,所制备的盐酸法舒地尔脂质体包封率达80.94%。结论：醋酸钙梯度法制备盐酸法舒地尔脂质体方法可行,所制得载药脂质体包封率达到制剂学要求,且重现性好。

支气管哮喘下调表达蛋白Annexin-1单克隆抗体的制备及其鉴定31-33

摘要：目的：应用细胞融合技术制备抗膜联蛋白-1（Annexin-1）的特异性单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法：采用重组免疫蛋白Annexin-1为免疫抗原,对Bal B/c小鼠进行免疫,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞经PEG融合,并间接用ELISA法筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,对阳性细胞株进行亚克隆并培养,然后接种于小鼠腹腔,诱导小鼠产生腹水,制备Annexin-1单克隆抗体。最后利用ELISA、Western Blot等技术鉴定所制备的单克隆抗体。结果：通过杂交瘤技术获得5株分泌抗膜联蛋白-1的杂交瘤细胞,分别命名为IA8、ID2、IE2、4E7和5G3,所产抗体,均为Ig GI亚型,轻链均为k链。分泌的5株单克隆抗体均能特异性结合Annexin-1蛋白。结论：本研究成功制备并获得了可稳定分泌Annexin-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株和Annexin-1特异性单克隆抗体,为其制备和临床检测奠定了医学基础。

法舒地尔抗纤维化作用的研究进展34-36

摘要：法舒地尔作为一种Rho激酶（Rho-associated Kinases,ROCK）抑制剂,目前,临床应用主要集中于缺血性脑血管痉挛、蛛网膜下腔出血、慢性脑缺血等的防治。ROCK激酶已被证实在自身免疫和炎症反应的信号通路中发挥着一定作用,而组织器官纤维化病变多为由脏器的损伤并伴有炎症和过度修复所导致。随着Rho激酶抑制剂法舒地尔药理作用的不断深入研究,大量研究报道表明,法舒地尔在某些组织器官纤维化病程中,能够抑制相关炎性因子的产生和表达,进而减轻纤维化程度,表现出一定的抗纤维化作用。

高压氧治疗移植皮瓣65例患者的护理体会37-38

摘要：目的：观察高压氧治疗移植皮瓣患者的皮瓣成活率。方法：65例移植皮瓣患者给予高压氧治疗,对照组50例进行常规护理与用药。结果：实验组在高压氧的治疗下皮瓣成活率为95.3%,对照组成活率68%,成活率实验组优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。生活质量评分差异有统计学意义（P〈0.05）结论：高压氧治疗皮瓣移植的护理临床效果好,成活率高。

黑龙江医药科学杂志调查与实验研究

阿尔海默茨病模型大鼠ERK的变化及山茱萸多糖干预39-40

摘要：目的：观察丝山茱萸对AD大鼠学习记忆功能的影响。方法：清洁级Wistar大鼠共75只;体重200~250g,随机分为6组：（1）假手术组,10只;（2）青年组,13只;（3）Aβ对照组,13只;（4）阳性对照组,13只;（5）水煎剂组,13只;（6）多糖组,13只;标准统一喂养,饮水自由。除青年组外,其他各组大鼠连续42d腹腔注射D-半乳糖（60mg/kg）,之后建立AD大鼠模型,采用淀粉样蛋白1-40（Bamyloid,1-40）海马立体定向微量注射方法;通过HE染色、erk的检测,观察大鼠海马CA1、CA3区神经元的变化。结果：青年组大鼠海马区锥体细胞排列紧密均匀,轮廓清楚,细胞核大而圆,胞浆清亮;假手术组大鼠海马细胞排列尚紧密、欠均匀,轮廓尚清;而Aβ对照组细胞排列松散、紊乱,胞体可见明显萎缩,可见细胞空泡样变、核固缩;阳性对照组、多糖组和水煎剂组细胞排列、细胞密度、核着色和细胞核形状等较Aβ对照组有所改善。ERK染色结果：模型组与正常对照组和假手术组比较,CA1和CA3区阳性细胞率明显下降,有统计学意义（P〈0.01）。山茱萸多糖、水煎剂及多奈哌齐组与模型组比较,CA1和CA3区阳性细胞率升高（P〈0.01）,多奈哌齐、山茱萸多糖及水煎剂组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：本实验以Aβ毒性学说为切入点,采用海马注射Aβ1-40制作大鼠AD模型,探讨山茱萸对AD的治疗作用及ERK的变化,为临床应用山茱萸治疗AD提供实验依据。

PBL教学法在普外科实习带教中的应用41-42

摘要：目的：对于普外科实习带教中实施PBL教学法的效果进行分析。方法：选取在我院普外科实习的某学院五年制本科生64例作为研究对象,以抽签的方式将其随机分为两组,实验组实施PBL教学法,对照组实施传统教学法,对两组考核成绩和学生对知识的掌握率进行分析。结果：实验组学生的理论成绩和实训成绩均好于对照组,组间数据相比差异明显（P〈0.05）;实验组学生对知识的掌握率也好于对照组,组间数据对比差异显著（P〈0.05）。结论：在普外科教学中实施PBL教学法,能够提高学生的学习成绩,使得学生能够对知识进行有效的掌握,效果明显,值得推广。

黑龙江医药科学杂志临床研究

育龄女性生殖道感染对宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的影响43-44

摘要：目的：探讨生殖道感染病原体后,发展成宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的影响,以及相关临床研究。方法：在2015-09~2017-09,选取我院（佳木斯大学附属第一医院）行检查确诊宫颈癌50例及100例CIN作为观察组。筛查结果均正常患者100例为临床对照组,在生殖道中经常感染的病原体中,从人乳头状瘤病毒（HPV）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）、解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）、阴道干化学监测（滴虫、外阴阴道假丝酵母菌VVC及细菌性阴道炎BV）中,分别在观察组与对照组感染相互比较,两组间患者生殖道感染上述病原体之间检测情况进行分析。结果：观察组中的CINI、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的患者HPV、HSV-2、CT、BV、滴虫的感染率是明显高于对照组患者感染率,差异有统计学意义（P〈0.05）;在观察组与对照组间比较,感染UU及VVC的感染率的关系,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：宫颈癌、CIN的发生与相关生殖道病原体感染是密不可分的,因此对女性生殖道感染病原体的检测、筛查,提早发现病变至关重要。

甲状腺全切除与近全切除术治疗甲状腺癌的效果对比45-46

摘要：目的：甲状腺全切除与近全切除术治疗甲状腺癌的临床对比效果。方法：选取我院62例甲状腺癌患者作为研究对象,根据患者的床位编号,随机分为全切组和近全切组各31例。全切组通过甲状腺全切除术进行治疗,近全切组通过近全切除术进行治疗,对比两组患者临床疗效。结果：治疗前,两组甲状旁腺素、血清钙离子水平无明显差异（P〉0.05）;治疗后,近全切组甲状旁腺素、血清钙离子水平均高于全切组（P〈0.05）;近全切组总有效率高于全切组,并发症发生率低于全切组（P〈0.05）。结论：甲状腺近全切除术治疗甲状腺癌疗效明显,能有效改善患者临床指标,降低并发症发生率,患者预后良好,安全性较高,值得在临床推广应用。