摘要:为了建立玉树地区独一味的简单重复序列区间聚合酶链式反应(ISSR-PCR)体系并筛选出引物,采用Mg2+、DNATaq酶、dNTP、模板DNA和引物进行5因素4水平正交实验,对独一味ISSR-PCR反应体系进行筛选。结果表明:最佳反应体系(25μL)为:10×PCR Buffer,75ng模板DNA,0.75μmol/L引物,0.5UTaq DNA聚合酶,1.25 mmol/L MgCl2,0.05 mmol/LdNTP。然后确定了引物的最佳退火温度,并筛选出811、818、825、826、834、835、836、840这8条丰富多态稳定扩增的引物。该研究建立的玉树地区独一味ISSR反应体系具有稳定、清晰以及重复性好等特点,可为该区独一味的繁育系统和遗传多样性的进一步研究提供参考。
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